C.エレガンスサバイバルアッセイ:短期毒性試験

要約

出典:Possik, E. and Pause, A. 96ウェルマイクロタイタープレートにおける線虫の酸化ストレス耐性の測定.J. Vis. Exp. (2015).

このビデオでは、急性毒性の治療や、毒性状態に対する耐性について遺伝的株をテストする短期生存アッセイを紹介しています。このプロトコル例は、パラコート (PQ) によって誘発される酸化ストレスに抵抗するワームの能力をテストする生存アッセイの例を示しています。

プロトコル

このプロトコルは、Possik and Pauseからの抜粋です。96ウェルマイクロタイタープレートにおけるCaenorhabditis elegansの酸化ストレス耐性の測定, J. Vis. Exp.(2015年)。

1. 酸化ストレス耐性アッセイの実施

1. 100 mM PQ溶液(新鮮に調製)40 μlを96ウェルプレートのすべてのウェルにピペットで移します。少なくとも12個のウェルを、すべての状態(治療、変異体など)の複製として使用します。プラチナワイヤーワームピックを使用して、開始時間と終了時間を示す5〜8匹のL4幼虫動物をすべてのウェルに移します。
2. 別の条件を開始するときは、開始時刻と終了時刻に注意してください。開始時刻から1時間後に線虫を移し替えてから死んだ動物を採点するまでの潜伏時間に、プレートを20°Cに置きます。
3. 解剖顕微鏡を使用して、1時間ごとに生存を数えます。高強度の光を見つけた後でも動かないワームを死んだ動物として示します。また、生きている動物の数も示してください。
   注:高倍率でワームの形状、尾、頭の動きを見ると、死んだワームと生きているワームを区別するのに役立ちます。
4. ほとんどのワームが死ぬまで、この手順を1時間ごとに繰り返します。

2. 各時点における生存率の決定

1. 各井戸に移された動物の総数を加算して、条件ごとの動物の総数を計算します。転送時に損傷を受けたり殺されたりした動物は無視してください。
2. 各時点について、条件ごとに死亡した動物の総数 (12 の井戸で死亡した動物の合計) を計算します。各時点について、死亡率 (死亡した動物の数を動物の総数で割って 100 を掛けた値) と生存率 (100 から死亡率を引いた値) を計算します。
3. このアッセイを少なくとも3回独立して繰り返します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Discovery v8 ステレオツァイス顕微鏡	ツァイス
96ウェルクリアマイクロタイタープレート