幼虫ロコモーションアッセイ:ゼブラフィッシュ幼生における化合物の神経行動毒性を研究するためのハイスループット法

要約

出典:Zhang B., et al. ゼブラフィッシュの幼生に対する環境汚染物質の神経行動学的影響の研究。J. Vis. Exp. (2020年)

この記事では、幼虫の運動を監視することにより、有毒化合物に対するゼブラフィッシュの行動反応について説明します。この議定書では、ゼブラフィッシュの幼生の環境汚染物質に対する反応の例をさらに見ています。

プロトコル

1. 動作テストの準備

1. 800 μL の露光溶液を 48 ウェルマイクロプレートのすべてのウェルに移します.
   手記：各グループ(制御溶液、5 μg/L、50 μg/Lグループ)ごとに16ウェルを使用します。
2. 1 mLのピペットチップを使用して、ガラス製のペトリ皿から1匹の幼虫を含む200 μLの露光溶液を48ウェルマイクロプレートの1ウェルに移します。
3. 4 mLの露光溶液を6ウェルマイクロプレートのすべてのウェルに移します.
   手記：各グループに1つの6ウェルマイクロプレートを使用します。
4. 1 mLのピペットチップを使用して、200 μLの露光溶液と2匹の幼虫を6ウェルマイクロプレートの各ウェルに移します><。 手記：各グループには 6 つの繰り返しグループがあります。
5. 試験室の温度が28°Cであることを確認してください。試験の2時間前.
   手記：行動テストは通常、午後に行われます。

2. 移動と経路角のテスト

1. プロトコルを保存し、テストルームの照明を落とします。
2. 幼虫をシステム内に10分間順応させ、「実験」「実行」ボタンを順番にクリックし、実験ファイルが保存されているフォルダを選択して結果名を入力します。
3. 「Background」「Start」ボタンを順番にクリックするとテストが始まります。
4. 「Experiment」「Stop」ボタンを順番にクリックすると、テストが終了したら実験を停止します
   手記：システムは、システムの停止時にテストされたデータを表示します。データには、3つの速度クラスで追跡された距離と、毎分8つの角度クラスでのパス角度番号が含まれます。提示された例のロコモーションテストでは、各光周期(10分)の合計距離が計算され、対照群と治療群の差が比較されます。
5. 48ウェルマイクロプレートをライトインキュベーターに戻して、他の実験を行います。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
48穴マイクロプレート	コーニング	3548	Embyrosハウジング
6穴マイクロプレート	コーニング	3471	Embyrosハウジング
ゼブラボックス	見方	ゼブラボックス	ビヘイビアインストゥルメント
ゼブララボ	見方	ゼブララボ	ビヘイビアソフトウェア
ピペット	エッペンドルフ	3120000267	トランスファーソリューション