成体ゼブラフィッシュ腸内解剖:化合物の吸収を解析する技術

要約

出典:Jie J. et al., 成体のゼブラフィッシュの経口挿管:生理活性化合物の腸内摂取を評価するためのモデル。J. Vis. Exp.(2018年)。

このビデオでは、生理活性化合物の腸内取り込みを評価するために腸を分離する技術について説明しています。このサンプルでは、成体ゼブラフィッシュから腸内を分離し、免疫賦活剤の取り込みを解析します。

プロトコル

1. ゼブラフィッシュの腸内解剖

1. 挿管後指定された時間(例:.、5時間および/または24時間)後、ネットを使用して魚を300 mg / Lエチル3-アミノ安息香酸メタンスルホン酸(MS-222)溶液に入れます安楽死。.蓋が動かなくなり、尾の挟み反射がないことを確認してください。通常は 5 分で十分です。
2. 安楽死させた動物をネットで拾い上げ、濾紙の上に置きます.
   手記：濾紙は、腸に沿って付着した組織を取り除くのに非常に便利です。
3. 鋭利な解剖ハサミを使用して、肛門から蓋まで半円形の切開を行い、細いピンセットを使用して切開します。腸の両端を切って内臓を全て取り出し、ろ紙の上に置きます
   注意：細胞の代謝と死を減らすために迅速に働きます.
   手記：または、PBSと氷上の接着組織を取り除きます。
4. 腸を内臓から分離し、その向き(腸の前部から後部)を保ち、伸ばすようにします。通常、腸の前部は後部よりも幅が広いです。解剖の際は、腸内を全て採取するように注意してください.
   手記：後端は小魚では非常に細かく壊れやすく、特に動物では折れることがあります<0.7g。
5. 濾紙の上でピンセットで腸を転がし、癒着組織を腸から剥がします。
6. さまざまなダウンストリーム分析のための腸の準備に進みます

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
MS-222	シグマ・アルドリッチ	E10521	粉
10倍PBS	シグマ・アルドリッチ	P5493
濾紙	フィルターラボ	RM14034252

型