管内注射:マウス乳腺の管に注射ミックスを送達する

要約

出典:Xiang, D., et al.Cre-発現アデノウイルスのマウス乳腺への管内注射による乳がんのモデリング。J. Vis. Exp (2019).

このビデオでは、マウスの乳腺の管に注射ミックスを送達する管内注射技術について説明しています。

プロトコル

1. 管内注射

1. 外科的処置全体を通して無菌技術を使用します。
2. 2 つの 4 番目の鼠径部 MG の間に ~1 cm の長さで皮膚に切開部位を作ります (図 1)。乳管樹を視覚化するために、皮膚フラップ(MGを使用)を頭頂腹膜から慎重に分離します。.
3. Watchmakerの鉗子で乳首を慎重に保持し、マイクロ解剖ハサミを使用して、近くの皮膚を切らないように外側の乳首を取り外します。
4. 33 G の金属ハブ ニードルを取り付けた 25 μL の Hamilton シリンジに 3 ~ 5 μL の Ad-Cre 注入混合物をロードします。シリンジ内の注射混合物の量を、混合物に含まれる青色の染料に基づいて推定します。
   手記：生後3〜4週齢の雌のMGに注射する場合は少量(例:3 μL)を使用し、授乳中の女性のMGに注射する場合は大容量(例:.、10 μL)を使用します。
5. 細い湾曲したピンセットで皮膚フラップの端をそっと保持し、Ad-Cre注射混合物を乳首にゆっくりと注入し、その間に乳管樹への青色染料の広がりを監視します。管腔への損傷を避けるために、注入速度をできるだけ低く保ちます.
   手記：注入された液体(含まれているブロモフェノールブルー染料によって示されるように)が間質コンパートメントに漏れることなく管木全体に広がることは、管内注射が成功したことを示しています。
6. 注入された液体の漏れを避けるために、針を乳首からそっと引き抜きます。
7. MGの遠位側(つまり、乳首から離れている)または注射された乳首の周辺領域を調べます。.膨潤した青色の染料(すなわち、近くの間質に拡散する染料)は、乳管内注射が成功したのではなく、乳腺脂肪パッド注射を示していることに注意してください。
8. 創傷クリップで皮膚の外科的創傷(1.2から)を閉じます。

2. 術後のケア

1. マウスを麻酔から外し、回復のために清潔なケージ内の加熱パッドに置きます。
2. 手術の24時間後に、メロキシカムを再び5 mg / kgで皮下投与します。.
3. 動物の一般的な状態を監視し、切開部位で感染の兆候を5日間探します。
4. 創傷クリップは手術後7~10日で取り外されます。

結果

図1:MGへのAd-Creウイルスの管内注射の概略図。(A) 2 つの 4 つの MG の間の正中線の切開部位 (B) 4 番目の MG の 1 つに青色染料 (より視覚化しやすくするため) を使用した Ad-Cre の管内注射 (C) 創傷クリップによる皮膚の切開の閉鎖

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
33ゲージニードル	ハミルトン	7803-05	ポイントスタイル3 ブラント
7mmリフレックスクリップ	ブレインツリー・サイエンティフィック	RF7 CS
アデノウイルス、Ad-K5-CRE	アイオワ大学ウイルスベクターコア	AD5-BK5-CRE (VVC-Berns-1547)
アデノウイルス、Ad-K8-CRE	アイオワ大学ウイルスベクターコア	AD5mK8-NLSCRE
ブロモフェノールブルー	シグマ・アルドリッチ	B0126-25G
ハミルトンシリンジ	ハミルトン	〒7636-01	0.025ミリリットル
マイクロ解剖ハサミ	ペンテア	9M	時計職人の鉗子
マイクロ解剖ピンセット	デュモン	M5

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