管内注射:マウス乳腺の管に注射ミックスを送達する

1. 管内注射

1. 外科的処置全体を通して無菌技術を使用します。
2. 2 つの 4 番目の鼠径部 MG の間に ~1 cm の長さで皮膚に切開部位を作ります (図 1)。乳管樹を視覚化するために、皮膚フラップ(MGを使用)を頭頂腹膜から慎重に分離します。.
3. Watchmakerの鉗子で乳首を慎重に保持し、マイクロ解剖ハサミを使用して、近くの皮膚を切らないように外側の乳首を取り外します。
4. 33 G の金属ハブ ニードルを取り付けた 25 μL の Hamilton シリンジに 3 ~ 5 μL の Ad-Cre 注入混合物をロードします。シリンジ内の注射混合物の量を、混合物に含まれる青色の染料に基づいて推定します。
   手記：生後3〜4週齢の雌のMGに注射する場合は少量(例:3 μL)を使用し、授乳中の女性のMGに注射する場合は大容量(例:.、10 μL)を使用します。
5. 細い湾曲したピンセットで皮膚フラップの端をそっと保持し、Ad-Cre注射混合物を乳首にゆっくりと注入し、その間に乳管樹への青色染料の広がりを監視します。管腔への損傷を避けるために、注入速度をできるだけ低く保ちます.
   手記：注入された液体(含まれているブロモフェノールブルー染料によって示されるように)が間質コンパートメントに漏れることなく管木全体に広がることは、管内注射が成功したことを示しています。
6. 注入された液体の漏れを避けるために、針を乳首からそっと引き抜きます。
7. MGの遠位側(つまり、乳首から離れている)または注射された乳首の周辺領域を調べます。.膨潤した青色の染料(すなわち、近くの間質に拡散する染料)は、乳管内注射が成功したのではなく、乳腺脂肪パッド注射を示していることに注意してください。
8. 創傷クリップで皮膚の外科的創傷(1.2から)を閉じます。

2. 術後のケア

1. マウスを麻酔から外し、回復のために清潔なケージ内の加熱パッドに置きます。
2. 手術の24時間後に、メロキシカムを再び5 mg / kgで皮下投与します。.
3. 動物の一般的な状態を監視し、切開部位で感染の兆候を5日間探します。
4. 創傷クリップは手術後7~10日で取り外されます。

図1:MGへのAd-Creウイルスの管内注射の概略図。(A) 2 つの 4 つの MG の間の正中線の切開部位 (B) 4 番目の MG の 1 つに青色染料 (より視覚化しやすくするため) を使用した Ad-Cre の管内注射 (C) 創傷クリップによる皮膚の切開の閉鎖