気管支内送達:実験薬を選択的にマウスの肺に投与する技術

要約

出典:Liao, S. et al. Direct Intrabronchial Administration to Improve the Selective Agent Deposition Within the Mouse Lung. J. Vis. Exp. (2019).

このビデオでは、実験薬を左右の遠位肺に選択的に投与する気管支内アプローチについて説明しています。注目のプロトコルでは、ブレオマイシンをマウスに気管支内投与して、肺線維症のより良いモデルを取得します。

プロトコル

動物が関わるすべての手続きは、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 非手術的IB挿管と送達アプローチ

1. 遠位右肺の選択的葉カニューレ挿入へのIBアプローチ
   1. 気管内(IT)カニューレ挿入(利き手を使用して、拡張カテーテルを口腔を介して気管に挿管する)を行った後、プラスチックボードを+30°回転させます(図1A)。
   2. カテーテルのハブを保持し、マウスの正中線と平行に自然にガイドし、表1.
      で説明されているように、カテーテルを重量ベースの深さまで伸ばします。 手記：これらの深さでの抵抗に注意する必要があります。この時点で、マウスは代表的な結果で説明されているように、わずかに頻呼吸になります。経験豊富なオペレーターの場合、試行の約90%が右肺のカニューレ挿入に成功します(頻呼吸が認められます)。
   3. 0.3% Evans Blue Dye (EBD、Table of Materialsを参照) 20 μL をゲルローディングチップ付きで送液します。
   4. ガラススポイトを使用して、1〜2アリコート(各0.1 mL)の空気を分注します><。 手記：これにより、カテーテル内部からの残留EBD溶液(または実験薬)のクリアランスが確保されます。
   5. カテーテルを抜いてから、マウスの位置を30秒間維持します。
   6. 動物が意識を取り戻すまで、動物を暖かい毛布の上に置きます。通常、回復は 2 分以内に完了します。
2. 遠位左肺の選択的分節カニューレ挿入へのIBアプローチ
   1. ITカニューレ挿入(利き手を使用して、拡張カテーテルを口腔を介して気管に挿管する)を行った後、プラスチックボードを-74°回転させます(図1B)。
   2. カテーテルのハブを持ち、穏やかな圧力をかけてカテーテルを左のメインステム気管支に進め、下向き(90°)とブックエンドに向かって適度な圧力をかけます。表1に記載されている深さでは、オペレーターは左肺の下部セグメントが噛み合っているときの抵抗に注意する必要があります。頻呼吸が発生した場合は、カテーテルを20〜25 mmの位置まで引き抜き、再試行してください。
   3. 左下肺セグメントにカニューレを挿入した後、薬剤投与のための重力補助を可能にするために、位置の変更が必要です。プラスチックボードを-30°回転させます(図1B)。
   4. 40 μL の 0.3% EBD をゲルローディングチップ付きで送液します。
      手記：左肺には葉が1つしかないため、より多くの薬剤を送達することが可能です。
   5. ガラススポイトを使用して1〜2アリコート(各0.1〜0.3 mL)の空気を分注します><。 手記：これにより、カテーテル内部から残留EBD(または実験薬)のクリアランスが確保されます。
   6. カテーテルを抜いてから、マウスの位置を30秒間維持します。
   7. 動物が意識を取り戻すまで、動物を暖かい毛布の上に置きます。通常、回復は 2 分以内に完了します。

結果

図1:選択的右/左肺葉カニューレ挿入および投与のアプローチ。(A)右肺を標的にするために、プラスチックボードを+30°回転させ、右主幹気管支を選択的に噛み合わせることを容易にします。カテーテルは(表1で提案されている距離ごとに)前進し、右側の葉を選択的に噛み合わせます。0.3% EBD を 20 μL 投与しました。試行の~90%で、後葉はカニューレ挿入されます。残りの10%の試行は、下葉に関与します。(B)左肺をターゲットにするために、プラスチックボードを最初に-74°回転させて左メインステムを噛み合わせます。カテーテルの挿管が成功した後、回転は-30°

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
22 G シールド IV カテーテル	BDの	381423
エバンスブルー染料	シグマ・アルドリッチ	E2129
LED-30W光ファイバーデュアルグースネックライト顕微鏡イルミネーター	アムスコープ	LED-30W
プレシジョングライドニードル、18G x 1インチ	BDの	305195	面取りされた先端、長さ12mm