肺癌細胞の3次元培養:細胞-マトリックス相互作用を研究する方法

この記事について

要約

このビデオでは、細胞とマトリックスの相互作用を研究するための肺癌細胞の3D培養の技術について説明しています。このプロトコルでは、TUM622 肺がん細胞の 3D 培養を行い、in vitro でオルガノイドを形成する可能性を探ります。

プロトコル

1. TUM622細胞の2D培養における継代と培養

TUM622細胞用の温温3D培地および細胞解離試薬(材料表を参照)を37°Cで使用。
TUM622細胞を2Dフラスコで80%のコンフルエント度で継代します。通常、これは通過後1週間で発生します。
T75フラスコから古い培地を捨て、6 mLのHEPES緩衝液で1回洗浄します。細胞に直接ピペッティングすることは避けてください。
HEPESバッファーを吸引します。4 mLのトリプシン/ EDTA(0.25 mg / mL、材料の表を参照)を追加してすばやくすすぎ、トリプシン/ EDTAを廃棄します。.
トリプシン/EDTAを2mL加え、37°Cで5分間インキュベートし、インキュベーターからフラスコを取り出し、フラスコを軽くたたいて気泡を作らずに細胞を緩め、フラスコをさらに5分間インキュベーターに戻します
手記：トリプシンへの長期の曝露は不可逆的に細胞を損傷し、その表現型を変えるため、細胞がトリプシンにさらされる時間を制限することが推奨されます。
細胞が分離し、解離したことを光学顕微鏡(4倍または10倍)で確認します。4 mLの中和バッファー(TNSバッファー)を加え(材料表の継代試薬情報を参照)、続いて10 mLの3....

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前	会社	カタログ番号	コメント
気管支上皮成長培地	ロンザ	CC-3170 ベグム
セルストレーナー40um	サーモフィッシャー	352340	TUM622セルの通過用
クールラック CFT30	バイオシジョン	BCS-138	3Dカルチャー用
クールシンクXT96F	バイオシジョン	BCS-536	3Dカルチャー用
Cultrex 3D細胞採取キット	バイオテクネ	3448-020-K
マトリゲル(単一栽培に好まれる)	コーニング	356231	3Dカルチャー用
Lab-Tec II チャンバー付き #1.5 ドイツ製カバーガラスシステム	ナルゲ・ヌンク・インターナショナル	155409 (8)	3Dカルチャー用
Lab-Tec II チャンバー付き #1.5 ドイツ製カバーガラスシステム	ナルゲ・ヌンク・インターナショナル	155379 (2)	3Dカルチャー用
ReagentPack サブカルグリ試薬	ロンザ	CC-5034	TUM622細胞解離用

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