蛍光同所性マウスモデル:がん細胞を発現するGFPをマウスに移植し、腫瘍の進行をin vivoで評価する

要約

出典:Moreno, J. A., et al. 膵臓癌の蛍光同所性マウスモデル. J. Vis. Exp.(2016)

このビデオは、緑色蛍光タンパク質発現膵臓癌細胞をマウスの膵臓に同所的に移植するためのプロトコルを示しています。同所性マウスモデルは、原発性および転移性腫瘍に対する新規治療薬の有効性を調査するのに役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とjove獣医審査委員会によって審査されています。

1. 外科的移植

>注:すべての手術材料と器具が無菌であることを確認してください。常に無菌技術を実践してください。

1. テーブルの上に加熱パッドを置き、滅菌ドレープで覆います。麻酔器をセットアップし、すべての消耗品が手の届くところにあることを確認します。
2. 動物の鼻を麻酔マスクに入れ、麻酔を1 L / minの酸素と2.5%イソフルランに設定します。
3. 動物の側面をヨウ素でやさしくこすり洗いし、70%エタノールですすいでください。3回繰り返します。
4. 後足をつまんで、動物が完全に麻酔をかけられていることを確認します。動物は完全に麻酔をかけられ、反応が観察されない場合は手術の準備ができています。ただし、動物がひるむ場合は、気化器に十分な麻酔がかけられていることを確認し、動物が完全に麻酔下に入る時間を増やしてください。
5. 約200 μlの細胞懸濁液を、18 G針(あらかじめ冷却済み)を備えた1.0 mLのTBシリンジにロードします。針を27Gの針と交換し、使用する準備ができるまで氷に戻します。
6. 脾臓の一般的な領域(腹部の左上腹部)を特定し、鉗子を使用してその領域の上の皮膚をつまみます。手術用ハサミを使って約1.0cmの切開を行い、ポケットを作ります。同様に、脾臓の上にある平滑筋をつまんで切り込み、腹腔にアクセスします。
7. 脾臓の尾側端をそっとつかみ、体から引き出します。膵臓は脾臓に付着します。湿った滅菌Qチップを使用して膵臓を広げ、膵臓の尾部を見つけます。
8. 50μlの注射液を膵臓の尾部に注入し、針を10秒間内側に置き、針をゆっくりと膵臓から回転させます。成功した移植は、漏れのない表面的な泡のように見えます。
9. 膵臓と脾臓を腹腔に戻します。最初に筋肉を囲み、次に皮膚を別々に囲みます。6-0縫合糸またはステープルを使用して切開部を閉じます。動物の痛みを避けるために、ケトプロフェンを皮下(SC)(5 mg / kg)に24時間以上投与します。.あるいは、ブプレノルフィンsc(0.05-0.1 mg / kg)を12時間ごとに36時間にわたって投与します。.
10. 動物を麻酔から回復させ、ケージに戻します。また、痛みを監視します。動物は、手術時(または手術前)に痛み止めを提供する必要があります。痛みを感じる動物には、IACCUCのプロトコルに従って、または主治医または被指名人の規定に従って、追加の鎮痛剤を提供する必要があります。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
アルケアまたは発泡消毒ハンドラブ	ステリス	639680
TB シリンジ 27 G 1/2	ベクトン・ディキンソン	305620
イソフルラン	ブルトラー・シャイン	50562
ケトプロフェン	フォートドッジアニマルヘルス
外科用ハサミ、5.5インチストレートマヨネーズ	ヘンリー・シャイン	22〜1600
PANC-1 GFP細胞株	アンチガン株式会社
小動物イメージングシステム:iBox Scientia	UVP、LLC.アップランド、カリフォルニア州。		生きた動物の蛍光腫瘍を観察するための小動物イメージングシステム
SutureVet PGA 6-0 PGAの	ヘンリー・シャイン	39010
PANC-1 GFP細胞株	アンチガン株式会社
DPBS(デュベルッコのリン酸塩緩衝生理食塩水)	サーモフィッチャーサイ	21300025