クローズ頭蓋窓を使用してマウス脳の微小循環の生体顕微鏡

Summary

軟膜微小循環の時間的空間的血行動態および炎症性イベントに追従するように生体顕微鏡。

Abstract

この実験モデルは 、in vivo蛍光顕微鏡で使用して、急性および慢性の、生理学的および病態生理学的血行動態、炎症、代謝状態のときにマウスの軟膜微小循環を評価するために設計されました。閉じた頭蓋ウィンドウは、マウスの左頭頂後頭葉皮質の上に配置されています。地元の微小循環は、エピと蛍光の照明を使用してウィンドウを使ってリアルタイムに記録されており、血管径と赤血球（RBC）速度の測定が実行されます。 RBCの速度は、リアルタイムの相互相関および/または蛍光標識赤血球を用いて測定されます。軟膜血管と血流と血管の漏出の評価に白血球や血小板の付着は、アルブミン- FITCおよび抗CD45 - TXR抗体などの蛍光標識マーカーの助けを借りて作られています。微小循環は、数日間にわたって繰り返して、ビデオを記録することができます。我々は、血液中の深遠な減少をマウスのマラリアberghei ANKAの感染症の経過中に動的な変化に追従する軟膜微小循環を研究し、CMの発現は血管収縮を特徴と微小循環機能不全に関連付けられていることを示すために最初にウィンドウを閉じるの脳生体顕微鏡を用い流れと最終的には血管虚脱。

Protocol

1。開頭術

8〜10週齢のマウスの開頭術では、チタンのバーは、動物の頭部に配置されていないことを除いて、前述の¹として事前に実行する必要があります。慢性頭蓋ウィンドウが注入された後、軟膜微小循環にも数ヶ月の検査を可能にする安定な製剤である。通常、我々は2〜3週間頭蓋窓の移植後に研究を行う。

2。生体顕微鏡検査

1. 開頭後の2〜3週間、体温をチェックしてから、マウスは軽く（誘導は4％、メンテナンスのため1〜2％）イソフルランで麻酔です。光麻酔は、実験手順の間に動物のストレスや不快感を防ぐために使用されます。
2. 動物は、定位固定フレームと慎重に耳のバーを使って安全に頭の上に腹臥位に配置されます。レベルは、右と左のレバーを使用して調整されます。中核体温は、加熱パッドを使用して維持されます。脳マラリアとマウスは低体温を開発しているので、温度設定は、各動物のために調整する必要があります。
3. 頭蓋窓上にカバースリップを静かに綿棒がウィンドウの下に鉱物油と容器のパノラマ画像で湿らせた綿棒でクリーニングされる実体顕微鏡の助けとデジタルカメラ（ニコンCOOLPIX 995、日本）で取得されます。画像は、印刷同定され、日付と血管径と赤血球（RBC）速度の測定のためのマップとして使用されますされています。
4. マウスは、生​​体内顕微鏡ステージ（ライカ-マクベイ....

Discussion

ここで説明する生体顕微鏡法は、マウスの軟膜微小循環の詳細な観察のためのユニークで強力なツールが用意されています。それは個々の細動脈と細静脈を疎かし、そのような血管径、赤血球の速度、血流、白血球、血小板などの血液の要素の遵守とローリング、血管漏出、組織のpHとPO2のようなパラメータの数の変化を測定し、潜在的に多くのことが可能となりますアプリケーション。 in vivoで血管反応で速やかにそのような薬剤の投与などの介入により評価、または病理学的プロセスの間にすることができます。また、微小循環の振る舞い​​は、動的に時間の経過とともに追跡することができます。我々はP.によって引き起こされる脳マラリアの間に軟膜微小循環の変化を研究するためにこの技術を使用しているbergheiマウスのANKA、そしてこのモデルでは神経学的症候群は脳血流量の減少、血管収縮、障害灌流、最終的には血管虚脱⁶によって特徴付けられる微小循環不全に関連付けられていることが示されている。

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
イソフルラン	バクスターインターナショナル株式会社
カルボシアニン色素 Dil	Molecular Probes, Life Technologies	D306
Albumin-FITC	Sigma-Aldrich	A9771
Anti-CD45-TxR Ab	Invitrogen	MCD4517<
em>P. berghei ANKA-GFP	MR4	MRA-865