ワームの研究室の紹介：培養ワームから変異へ

サマリー

表現型欠陥の変異体のスクリーニングは、特定の生物学的プロセスで機能する遺伝子を同定するための簡単​​な方法です。この記事では、どのように文化の自由生活のワーム（例えば、への説明 Pristionchus pacificus）実験室で、二つの異なる突然変異誘発法、EMSおよびTMP / UVを示しています。

要約

紫外線（TMP / UV）と組み合わせエチルメタンスルホネート（EMS）と4,5'、8 - トリメチル：このプロトコルは、実験室で、どのように2つの代替方法を使用して突然変異を起こさせるために線虫を維持するために手順を説明します。線虫が原因の自己施肥雌雄同体と動物あたりの子孫の数百を生成することができる男性で構成される彼らのシンプルなボディプランと配偶システムの遺伝学研究のための強力な生物学的なシステムです。線虫は、細菌の芝生を含有する寒天プレートに保持され、簡単にプレートからピックを使用して別のに転送することができます。 TMP / UVは、主に欠失を誘導しながらEMSは、一般的に点突然変異と小さな欠失を誘導するために使用されるアルキル化剤です。使用されている線虫の種によっては、EMSとTMPの濃度は、最適化する必要があります。線虫Pristionchusのpacificusの劣性変異を分離するには、F2世代の動物が視覚的に表現型のスクリーニングを行った。これらのメソッドを説明するために、我々は、ワームの突然変異誘発し、非協調（UNC）、みすぼらしい（DPY）と変圧器（トラ）変異体を探した。

プロトコル

パート1：準備線虫の増殖培地（NGM）ペトリ皿

このような線虫やPと実験線虫pacificusは通常、線虫の増殖培地^{（NGM）1を}含む6センチメートルペトリプレート上で実験室で培養されています。ワームは、20 ° Cに保たれていますが、気温の範囲（° C 4との間の - 25℃）でインキュベートすることができる線虫の種および実験計画に応じて、。 NGMでプレートを準備するには、標準的な滅菌技術は、真菌や細菌汚染を防ぐために使用する必要があります。以下は、NGMプレートを準備するプロトコルです。

1. 15gの寒天、2.4グラムのNaCl、2gのトリプトン、および2.72グラムのKH ₂ 2 Lの三角フラスコ中のPO _4を量り、水で1 Lにボリュームを構成してオートクレーブし、60℃の水浴中を冷却することができます。
2. 0.8ミリリットル1 M _塩化カルシウム、コレステロール（エタノール中の5 mg / ml）をそれぞれ、と1 M MgSO _4を追加。真菌や細菌汚染を防ぐために、1 mlのストレプトマイシン（100 mg / ml）をし、1ミリリットルナイスタチン（10 mg / mlのは）培地の各リットルに追加することができます。
3. Unispenseのマシンを使用....

ディスカッション

変異導入は、様々な実験モデル生物で遺伝学的研究に広く使用される技術です。変異導入実験はしばしば遺伝子²の機能を識別するために使用されます。ここで説明する変異誘発の手順は、P.のためだけでなく、使用することができます。 pacificusだけでなく、Cの虫や他の関連線虫の種。ここでは二つの方法、EMSおよびTMP / UV変異導入を説明します。

EMSは、ゲノム^3,8を通して点変異または小欠失を誘導する化学物質です。ソラレン変異誘発（TMP / UV）は、主に紫外光により誘導される可能性が破損のためにDNAの欠失変異を誘発する。削除の断片は長さ³の0.10〜15キロバイトの範囲にある。

我々は見つけることが比較的一般的な表現型をスクリーニング。 EMSを使って画面で、F2動物との各400プレートに、約1プレートはdpy、UNCまたはトラを持っていた。非対称分裂は、雄の表現型とXX核型