マウスモデルにおける治療送達のための定位固定槽マグナアプローチ

要約

出典: Joshi, K., et al.マウスのCisterna magnaを介して尾側脳幹と上部頚髄にマイクロインジェクションする定位外科的アプローチ。J. Vis. 経験。(2022年)

このビデオでは、脳幹と上部脊髄への標的送達のための槽大定位固定アプローチを示します。このアプローチは、脳脊髄液で満たされた大槽にアクセスすることにより、標準的な定位固定法では到達が困難な領域への正確な注射を可能にします。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1.槽膜の開口部

1. 角度の付いたデュモン鉗子を使用して、後頭骨からアトラスまで伸びる硬膜をつかみます。後頭骨近くの硬膜をつかみ、バネはさみを使用して硬膜に小さな開口部(~0.5〜1.5 mm)を作ります。
   注:この吻側の位置では、脳幹と上にある硬膜の間のスペースが最も広く、硬膜を安全に操作するための十分なスペースを提供します。
2. スプリングハサミを使用して硬膜を持ち上げ、硬膜をさらに開きます。ウィンドウのサイズはターゲットによって異なります。
   注:複数の縦方向の注入または両側の注入を行う場合は、より大きなウィンドウが必要になります。片側または正中線の注射を 1 回行う場合は、小さなウィンドウで十分です。
3. 硬膜が開いたら、滅菌キューチップで余分な脳脊髄液を排出します。

2.ランドマークとゼロ点の識別

開

1. いた硬膜を通して詳細なランドマークのある脳幹の背側表面を表示します。中心管がIV心室に通じる点であるobexは、標準的な前後および中外側のゼロ点です。

3. ターゲットの注入

1. : 定位固定アームを使用してピペットまたはシリンジをターゲットに下げ、標準的な定位固定アプローチと同様に溶液を注入します。3〜50 nLの容量を使用する場合、針の跡を避けるために、注射後1〜5分間所定の位置に置いてください。次に、定位固定アームを使用してピペットまたはシリンジを持ち上げます。
2. 複数のターゲットに対して、手順 3.1 を繰り返します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
角度の付いた鉗子、Dumont 5/45	FST	11251-35	硬膜をつかむためだけ
サミ、Vannas 2.5mm、付属のボックス付き	FST	15002-08	硬膜を開くためだけのハサミ、体を持ち上げるための箱
マイクロマニピュレーター	Kopf	1760-61	電極ホルダーに取り付けられ、座標に基づいて位置を調整
「U」フレームアセンブリと細胞内ベースプレート	Kopf	1730-B、1711	手術用フレーム
滅菌綿チップアプリケーター	ューリタン	25-806 10WC	手術野からの血液吸収

にスプリングハ 定位 定位 ピ