神経膠芽腫マウスモデルにおける柔軟な生体適合性プローブの移植

要約

出典: Lefevre, MC, et al., 神経膠芽腫のパルス電界治療のための柔軟な有機電子デバイス。J. Vis. 経験。(2022年)

このビデオでは、神経膠芽腫マウスモデルに柔軟で生体適合性のあるプローブを移植して、神経治療用途に標的パルス電場療法を提供する方法を示します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. in vivoモデル
   注:成体多色蛍光AMU-Neuroinflamマウス(B6.Cg-Tg(Thy1-CFP)23Jrs(Ly6a-EGFP)G5Dzk(Itgax-EYFP)1Mnz/FD)を使用しました。これらのマウスは、ECFPのトランスジェニック発現によるThy1⁺ニューロンの亜集団の標識、EGFPのトランスジェニック発現による末梢LyzM⁺炎症細胞の標識、およびCd11c⁺の制御下でEYFPを発現するミクログリアのサブタイプの標識を示します。簡単に言えば、動物は、治療または注射の前に、1.5%イソフルランで2分間軽く鎮静されます。手術前に、動物はケタミン(120 mg / kg;IP) およびキシラジン (12 mg/kg;IP)です。次に、3% リドカイン ゲルを局所的に塗布して、定位補助の固定に伴う耳の痛みを軽減します。次に、開頭術による痛みを軽減するために、0.25% ブピバカイン溶液を手術部位に投与します。マウスが手術の準備をしたら、直径4mmの開頭術が行われました。26 Gの針で、開頭術の真ん中の硬膜に穴を開け、注射システムで腫瘍スフェロイドを注入しました。さらに、ここで説明するように、開頭術をガラス窓で密閉する前に、腫瘍スフェロイドを発現するGCamp6またはDsRedに柔軟な電極を配置した。
   1. 開頭術を覆うようにダルベッコリン酸緩衝生理食塩水(DPBS)を一滴垂らします。柔軟な電極をDPBSのドロップに置き、コンタクトパッド付きのプローブの背面をマウスの背中にそっと置きます(図1B)。
      注:滅菌手袋と「チップのみ」の技術を使用してください。非滅菌表面に接触した場合は、手袋を交換してください。この手順では、熱サポートを提供します。
   2. プローブが硬膜に平らに置かれ、脳の湾曲に追従できるようになるまで、DPBS ドロップを小さな紙で触れて DPBS を吸収します。DPBSの小さな層が電極の側面から逃げることなく、電極の下に残っていることを確認してください。これにより、次のステップでの接着剤のこぼれに対するバリアが確保されます。
      注: 使用前にすべての機器を滅菌してください。
   3. プローブにシリコン接着剤を少量垂らし、5mmの丸いカバーガラスで覆います。シリコンが均一に分散し、カバーガラスとプローブの間の距離が最小になるまで、カバーガラスを押し下げます。カバーガラスをさらに30秒間押し下げて、シリコンが固まるようにします。
   4. カバーガラスを固定するには、側面に瞬間接着剤をすばやく塗布し、接着剤が固まるまで押し下げます。
   5. つまようじを使用して、プローブの首に瞬間接着剤を塗布し、瞬間接着剤が首の下に引き込まれるように注意して、プローブを安定してサポートします。
   頭
   6. 蓋骨を歯科用セメントで覆い、慢性的なキャップを作ります。カバーガラスの端のみを覆うように特に注意してください。
   7. プローブの背面を持ち上げ、首の下にセメントを塗布します。硬化する前に、プローブをセメントの上に置きます。実験中は、プローブの表面がカバーガラスと同じ高さになり、顕微鏡の対物レンズの邪魔にならないように、鈍い鉗子でプローブの首をそっと押し下げます。
   8. プローブをしっかりと保持するために、プローブネックの上部を1.5mm以下の歯科用セメント層で覆います。カバーガラスの周囲1〜2 mmの距離に1.5 mmの隆起を提示するセメントウェルを構築し、2光子イメージング用の浸漬液用の洗面器を作成します(図1C)。
   9. セメントが硬化したら、ブプレノルフィンの術後鎮痛薬(0.05 mg / kg、体重10 gあたり0.1 mLを皮下投与)を塗布し、目覚めるまで動物を暖かい雰囲気に保ちます。これには、赤外線電球への近接や、動物をペーパータオルで包むことが含まれます。
      注:温度計をマウスの高さに置いて、温度を監視します。
   10. ポテンショスタットを使用して、1〜10kHzの範囲のインピーダンスを特性評価します。
   11. 動物を少なくとも10日間手術から回復させます。手術直後に抗炎症薬を投与し、動物の状態を監視して適切な術後鎮痛を提供します。

結果

図1:in vivoアプリケーション。(A)in vivo実験のスキーム。(B)カバーガラスとアクリル樹脂を塗布する前のプローブの配置。(C) プローブ移植が完了した。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
クリル樹脂	ッシャー科学	NC1455685
ブプレノルフィン	Axience
ラボ製パルス発生器
ペニシリン/ストレプトマイシン	Gibco	15140-122
リン酸緩衝生理食塩水	Thermofisher	D8537
Protolaser S	LPKF
丸いカバーガラス 直径 5 mm	Fischer Scientific	50-949-439
シリコーン接着剤 Kwik-Sil	World Precision Instruments
瞬間接着剤	デポ
U87-MG	ATCC	HTB-14	ト神経膠芽腫細胞

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