マウスモデルにおける非侵襲的神経調節のための眼科薬物送達

要約

出典: Zhan, J., et al.DREADD制御ニューロン活動の慢性操作のための非侵襲的戦略。J. Vis. Exp. (2019)

このビデオは、標的神経調節のための非侵襲的な眼科用薬物送達法を示します。この薬は点眼薬を介して送達され、循環に吸収され、血液脳関門を通過し、特定のニューロン受容体を活性化します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1.点眼薬を使用したクロザピン-N-オキシド(CNO)の反復送達点

1. 眼薬の投与前に3〜4日間、各マウスを毎日3分間首筋にすることにより、動物を取り扱いに順応させます。
2. クロザピン-N-オキシド(CNO、5 mg)を1 mLの滅菌0.9%生理食塩水(ストック溶液:5 mg CNO / mL)に溶解します。溶液は4°Cで冷蔵保存してください。
3. 実験を開始する前に各マウスの体重を量り、送達するCNOの量を決定します。1〜3 μLの滴(1眼あたり)を使用して、1.0 mg CNO / kg体重を達成します。
   注:例として、20 gのマウスは両側(各2 μL)点眼薬を受け取る必要があります。
4. マウスの非活性(光)段階、ライトが消える2時間前に点眼薬を送達します(ツァイトゲバー時間(ZT)10)。マウスの活動期(暗期)にCNOを送達する必要がある場合は、動物を適切に取り扱うために薄暗い赤色光が存在することを確認してください。
   注:実験動物の概日(および明暗)サイクルを乱さないように予防措置を講じる必要があります。
   1. P10マイクロピペットを使用して、必要な量(1〜3 μL)のCNO溶液をロードして、1.0 mg CNO / kg.
      注:点眼薬ごとに新しい滅菌ピペットチップを使用してください。この一連の実験では、CNO の両側点眼薬が実施されました。ただし、より低い CNO 濃度が必要な場合は、片側点眼薬を適用することもできます。
   2. 首筋からマウスを固定します。
   3. ピペットチップに安定した液滴が形成されるまで、溶液をゆっくりと排出します。
   4. 溶液が送達されるまで、液滴をマウスの目の角膜に注意深く近づけます。ピペットチップがマウスの目に接触してはいけません。
   5. マウスを放し、ホームケージに戻します。
5. この手順を5日間毎日繰り返します。
   注:この期間は、実験要件に応じて調整できます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
BSA	シグマライフサイエンス	#A2153-100G	凍結乾燥粉末≥96%(アガロースゲル電気泳動)
C57BL/6Jマウス	ジャクソン研究所	#000664	雄マウス、生後3ヶ月
細血管	ドラモンドサイエンティフィックカンパニー	#3-000-203-G/X	外径:1.14インチ
クロザピン-N-オキシド	シグマ	#C0832	5mg
Forane	Baxter	#NDC 10019-360-60	イソフルラン、USP
マイクロインジェクター III	Drummond Scientific Company	#3-000-207	Nanoject III - プログラム可能なナノリットル インジェクター
マウント メディア	Invitrogen	#P36930	Prolong Gold 退色防止試薬

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