Cisterna Magna注射によるマウスモデルにおける標的薬物送達

要約

出典: Zamboni, M., et al., Induction of Leptomeningeal Cells Modification via Icisternal Injection.J. Vis. 経験。(2020年)

このビデオは、麻酔をかけたマウスのシステルナマグナに誘導薬を送達する手順を示しています。この注射は、脳脊髄液を介してアクセスできる脳表面細胞に蛍光マーカーの発現を選択的に誘導し、蛍光イメージングによって確認されます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 処置のための動物の位置

決め

1. 動物の頭をヘッドホルダーに固定します。マグナ貯水槽へのアクセスを改善するには、動物の体をテーブルの表面から約30°に配置し、頭を下向きにして、体の残りの部分と120°の角度を確立し、首の後ろを伸ばしてマグナ貯水槽へのアクセスを容易にします(図1A)。
2. 動物の下にペーパータオルを追加して、処置中ずっと動物の体をサポートします。
3. マウスピースを介した麻酔供給を確保し、イソフルラン濃度を2.5%に下げ、空気供給を200ml/minに下げます。
4. 眼科用軟膏を塗ります。

2.システルナマグナの露出

動物

1. の首の後ろを剃り、70%エタノールとベタジンでその領域を消毒します。
2. 外科用ハサミを使用して、後頭骨のレベルから始まり、後方に伸ばす正中線切開(長さ約7 mm)を行います。
表
3. 層結合組織と首の筋肉をそっと分離し、先端の細いピンセットで正中線から横に引っ張ります。これにより、逆三角形の形をした大槽を覆う硬膜膜が露出します。
滅
4. 菌吸収槍または綿棒を使用して、結果として生じる出血を制御します。
5. 小さな外科用セパレーターを配置して、首の筋肉を脇に引き寄せた状態を維持し、処置全体を通して大槽を視覚化できるようにします。

3.槽内注射

1. 大槽にアクセスするには、後頭骨の尾端を特定し、以前に曲げられた針をすぐ下に挿入します。
   注:硬膜に穴が開くと、抵抗が急激に低下します。ただし、針の先端は、その鉤状の形状のおかげで、髄膜表面のわずかな下にしか貫通しません。
2. 硬膜に穴が開いたら、針を頭蓋骨に「引っ掛ける」ために、注射器を動物の体と平行に上向きにそっと引っ張って、針の曲がった先端を硬膜表面の下に浸透させます(図1Bを参照)。これにより安定性が向上し、針がより深く浸透するのを防ぎ、下にある小脳や髄質を損傷するリスクを回避します。
3. 脳脊髄液の自然な流れへの干渉を避けるために、化合物をゆっくりと注入してください。
   注:実験の目的によって、注入速度は異なる場合があります。ゆっくりとした安定した注入速度が必要な場合 (たとえば、脳脊髄液の動きを追跡する手順を使用する場合)、注射器と組み合わせて自動マイクロインフュージョン システムを使用することをお勧めします。
4. 注射後、針をその部位に1分間置き、慎重に取り外します。先端の細い鉗子を使用して、針を引っ掛けた位置から引き込むのを助けます。
   注:細い針(例:30 G)を使用しても、髄膜に重大な損傷を与え、その結果として脳脊髄液が流出することはありません。より大きな針サイズが必要な場合は、滅菌コットンチップを使用して注射部位に圧力を加えて液体の漏れを止めることをお勧めします。

結果

図1:エンドキシフェンの槽内注射による軟髄膜細胞の特異的標識。パネル A と B は、槽内投与用に開発された手順を示しています。シタンクマグナにアクセスするには、首の後ろを伸ばす必要があります。したがって、麻酔をかけた動物は、体と頭の間に約120°の角度で配置され、頭は下向きに傾いています(A)。鉤状の針により、注射器を頭蓋骨に固定し、溶液の手動投与を安全に進めることができます...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
麻酔ユニット	Univentor 410	8323102	チャンバーとマウスヘッドホルダーに接続する気化器、チャンバー、チューブの一品
酔(イソフルラン)	Baxter Medical AB	890
Betadine	Sigma-Aldrich	PVP1
Endoxifen	Sigma-Aldrich	E8284
エタノール 70%	Histolab	1370
ハミルトン注射器 (30G 面取り針)	Hamilton	80300
マウス ヘッド ホルダー	Narishige International	SGM-4	吸入用無湿薬用マウスピース付き。または、定位フレームを使用してください
さみ	ファインサイエンスツール	15009-08
シェーバー	Aesculap	GT420
滅菌吸収槍	ファインサイエン	18105-01	滅菌綿棒も良い選択肢です
外科用分離器	ワールド精密機器	501897
ピンセット	デュモン	11251-35

麻 はスツール