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動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。
8週齢の成体雄C57BL/6Nマウスを使用した。
1. 術前のセットアップ
- オートクレーブ滅菌、滅菌された手術器具、機器、鎮痛薬、麻酔薬を適切に在庫してください。
- 手術台に十分な作業スペースを確保してください。
- おむつで覆われたカスタマイズされた外科用フォームボードをマウスのベッドとして使用して、手術台を準備します。滅菌ガーゼで覆われた医療用テープで発泡ボードに加温パッドを固定します。
- 血管鉗子で鍼を曲げて半分に折り、折りたたんだ鍼の先端をフック状に曲げてリトラクターを作る。鍼の端にゴムストリップを固定し、画鋲を使用してゴムストリップの端をフォームボードに固定します。
- 実体顕微鏡を校正します。適切な焦点距離を持つ実体顕微鏡を選択してください。ズーム/フォーカスボタンを滅菌アルミホイルで覆い、外科医が手術中に調整できるようにします。滅菌されたアルミホイルをズーム/フォーカスボタンに貼り付け、外科医が滅菌手袋を着用して使用できるようにしました。
2.マウスの麻酔と準備
マウス
- の体重を量り、体重(イソフルラン3%)に応じて麻酔します。麻酔の深さを確認するために、マウスの足の指間スペースをつまんでもマウスが反応しないことを確認します。処置中は適切な麻酔深度を維持する必要があります (1% イソフルラン)。
- 手術中の角膜の炎症や乾燥を防ぐために、眼科用軟膏を両側から目に塗布します。
- 首と胸の毛皮を自動バリカンで剃って手術部位を準備します。抜け毛を取り除き、きれいにします。
- 滅菌ガーゼで覆われた加温パッドの上にマウスを仰臥位に置きます。操作中、マウスの温度を37°Cに維持します。マウスを医療用テープで固定して、前肢を水平に外転させ、後肢と尾が動かないようにします。適切な開口部を備えた滅菌済み使い捨て外科用ドレープをマウスに置きました。
3. 手術手順
- 先制鎮痛としてトラマドールを注射します (20 mg/kg、腹腔内または腹内投与)。鎖骨の上端の横切開に印を付けます。ヨードフォア消毒液とエタノールを交互にスクラブを3サイクル使用して、手術部位を消毒します。手術前につま先をつまんで麻酔の深さを確認します。
- 顕微鏡下で作業し、滅菌メスを使用してマークに沿って4mmの横方向の切開を行います。必要に応じて、処置中に切開部を拡大します。
- 皮下筋膜を直視して解剖し、顎下腺の下縁を特定します。顎下腺を上に引っ張って、鎖骨上窩と胸骨を露出させます。
注:この領域には小口径の血管がある可能性があります。電気焼灼は止血に使用できます。 - 正中線に沿って胸骨を頭から尾まで切開することにより、胸骨の部分的な正中切開(~4 mm)を行います。胸骨切開中に胸膜、心臓、血管を保護します。
- 胸骨舌骨筋を特定します。鍼で作られた2つの小さなカスタマイズされたリトラクターで胸骨をそっと引っ張り、気管と食道の上の胸骨舌骨筋を特定します。この筋肉を引っ込めて、頸動脈、内頸静脈、横隔神経、迷走神経、気管、食道を露出させます。
注:気胸が開かないように、胸骨をそっと引っ込めます。人間とは異なり、マウスの食道は気管の後ろではなく、左側の気管に隣接しています。 - 左腕神経叢を特定します。左内頸静脈の外側端で、筋膜と脂肪組織を外側に引っ張って腕神経叢を露出させます。3つの枝を持つ頸部またはC5およびC6神経で構成される上幹を探します。C7神経で構成される中幹と、C8神経と胸部神経またはT1神経で構成される下幹を、マウスの尾まで上部体幹に沿って識別します。
注:腕神経叢の表面には縦方向の血管があります。出血を防ぐために電気焼灼を使用してください。左腕神経叢を分離するときは、乳び管を保護して乳び瘻を避けます。 - 左のC7神経を採取します。中幹(C7神経)の前部および後部部を鎖骨下の部から臍帯までのレベルまで遠位に解剖し、神経幹への局所注入により0.1mLの2%リドカインでC7神経を遮断します。C7神経を外側索および後索との合流点でヴァンナススプリングハサミで切除します。各部門の長さが似るようにC7神経をトリミングします。
注:C7神経の前部と後部、および上部と下部の体幹の前部と後部は合流前に長い距離を走っているため、切除前にC7神経を十分に解放する必要があります。実際、C7神経は必ずしも2つの部分に分かれているわけではありません。3つの部門に分けられたり、まれに4つに分かれたりすることもあります。 - 左側のC6腹側層を取り外します。横隔神経を注意深く保護し、C6セグメントのレベルで前斜角筋を切断して、C7神経根を露出させます。傍脊髄筋を神経支配するC7神経の小さな枝をマイクロ鉗子で切断します。C7神経をそっと引き抜き、C6腹側層を慎重に切除します。
注:左頸動脈の内側と食道の外側の間に骨の隆起があります。この骨の隆起は、第6頸椎の腹側層です。C6腹側層の外側縁の縦筋は前斜角筋であり、横隔神経は前斜角筋の表面を走っています。 - 右のC7神経を採取します。左側と同様に右側の前斜角筋を切断し、椎間孔に近い右側のC7神経根を横断します。右C7神経を分割レベルから解剖します。
注:神経の下の血管への損傷を防ぐために、右C7神経を慎重に切断します。 - 左C7神経を移植します。
- 両側の椎体の横にある筋長筋を部分的に取り除きます。気管食道と椎体の間の空間を鈍く分離して拡張します。
椎- 体の右側から脊椎前ルートを介して左側に半折りの5-0ナイロン縫合糸を送ります。
- 左 C7 神経を輸液チューブでヒッチし、脊髄前ルートを介して神経を右側に導きます。
- 気管と食道をそっと引っ込め、12-0ナイロン縫合糸を使用して、左C7神経の前部と後部を緊張せずに右のC7神経根に固定します。神経の周りの神経上膜を4〜5針縫合して、神経を強く接合させます。
注:適切な厚さのプラスチック製輸液チューブを選択することが重要です。チューブが細すぎると神経が損傷する可能性があり、チューブが太すぎると気管や食道が損傷する可能性があります。また、気管食道と椎体の間の空間は「V」字型の空間であり、筋長結骨の一部を切断すると、伝達経路を短くすることができます。
4.創傷閉鎖
滅
- 菌生理食塩水で創傷を洗浄し、滅菌ガーゼで乾燥させます。
- 胸骨を縫合し、5-0モノフィラメント縫合糸を使用して皮膚を閉じます。
5.術後のケア
- マウスが麻酔から目覚めるのを待ちます。マウスを寝具のない清潔なケージに移しますが、保温毛布で温めます。マウスが歩行可能になるまで観察します。術後鎮痛薬としてトラマドール(20mg/kg、ip)を使用してください。
- マウスを回復ケージに入れ、回復するまで監視します。手術後にマウスの水分と食事を回復します。術後、栄養失調、猫背の姿勢、毛皮の波立つなど、障害や感染の兆候がないかマウスを毎日監視します。手術後2週間で、抜糸を行う必要があります。
注:エリスロマイシン軟膏を3日間連続して毎日創傷表面に塗布します。 - 創傷浮腫などの合併症が観察された場合は、すぐに解決する必要があります。