透過型電子顕微鏡を用いたシアノバクテリア細胞外小胞の可視化

要約

出典: Biller, SJ, et al.シアノバクテリア細胞外小胞の単離と特性化J. Vis. 経験。(2022年)

このビデオでは、陰性染色による透過型電子顕微鏡用のシアノバクテリア細胞外小胞の調製を示し、構造分析や比較分析のために小胞の形態、サイズ、純度を高解像度で視覚化することができます。

プロトコル

1.単離された小胞の特性評価

1. ネガティブ染色透過型電子顕微鏡検査( 材料表を参照)(TEM - 透過型電子顕微鏡、粒子サイズ、構造、純度)を実行します。
   1. 画質を向上させるには、メーカーのガイドラインに従って、グロー放電システムを使用して、旧コーティングされたTEMグリッドの表面をグロー放電します( 材料表を参照)。
   2. ~5 μLの小胞サンプルを慎重に塗布し、5分間放置します
      >注:小胞濃度>10^{9 mL-1}のサンプルは、通常、最良の結果をもたらします;希薄なサンプルは、画像あたりの小胞が少なくなります。
   3. グリッドの端を清潔なろ紙に接触させてサンプルを取り除きます。
   4. プラスチックフィルムで覆われた平らな面に20〜50μLの2%酢酸ウラニル滴( 材料表を参照)をピペットで垂らし、その上にグリッドを浮かべて2分間置きます。
   5. ろ紙を使用して酢酸ウラニルを取り除き、超純水を一滴垂らして洗浄します。水洗いをもう一度繰り返します。
      注:最終的なドライグリッドは、ステップ1.1.5の後に視覚化する準備ができています。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
2% 酢酸ウラニル溶液	Electron Microscopy Sciences	22400-2	ネガティブ染色 - TEM
カーボン サポート フィルム 200 メッシュ、銅。CF200-Cu	電子顕微鏡 Sciences	71150	透過型電子顕微鏡 (TEM) グリッド
easiグローグロー放電洗浄システム	Ted Pella	91000	商用 TEM グリッドグロー放電装置
Milli-Q 基準浄水システム	Merck	Z00QSV0WW	タイプ I 超純水を得るための浄水システム
透過型電子顕微鏡	JEOL	JEM-1400	または類似の顕微鏡