バイオミメティックビーズを使用した細菌と宿主細胞の相互作用の評価

要約

出典: Stones, DH, et al.細菌と宿主の相互作用を特徴付けるためのバイオミメティック材料。J. Vis. 経験。(2015年)

このビデオでは、バクテリオム模倣ビーズを使用して、競合条件下で宿主上皮細胞への細菌の接着を定量化する方法を示します。細胞の処理、溶解、およびコロニー形成単位を測定するための連続希釈液のプレーティングに関連する手順の概要を説明します。

プロトコル

1. 細菌接着の測定
   1. 指定された時点で(感染後1時間など)、細胞層から培地を除去します。
   無
   2. 菌で予熱したリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で細胞層を完全に洗浄し(それぞれ1 ml PBSを少なくとも3〜4回洗浄)、付着していない細胞を除去します。
   ウェルあたり1mlの
   3. 滅菌1%v / v Triton X-100溶液をPBSに添加することにより、宿主細胞を溶解します。プレートを37°Cで5分間インキュベートします。
   4. 各サンプルを数回上下にピペットで移動させてから、各ウェルの内容物を別々の1.5mlチューブに移します。サンプルを滅菌PBSに10倍に連続希釈して調製します(たとえば、100mlのサンプルと900mlのPBSを使用します)。
   5. 各サンプル100 μlを海洋Luria-Bertani(MLB)寒天培地にプレートし、セルスプレッダーを使用して散布します。細菌株と時点に応じて、プレートする希釈液を最適化します。
      注:記載されている実験セットアップでは、10⁵倍または10⁶倍の希釈により、適切な数のコロニー形成単位(CFU)が得られます。
   6. プレートを37°CのO / Nでインキュベートし、コロニーカウントによって細菌を列挙します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
試薬
カルボン酸変性ポリスチレンビーズ	Sigma	CLB9	有害; さまざまな代替粒子サイズと色が利用可能です
ダルベッコの改良イーグル培地 - 高グルコース - 4500 mg/Lのグルコースと重炭酸ナトリウム、L-グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、フェノールレッドなし、液体、滅菌ろ過、細胞培養に最適	感染実験用	シグマ	D1145
主細胞の維持用DMEM		シグマ	D6429
シ胎児血清、熱不活化	シグマ	F9665	組織培養培地用サプリメント
ペニシリン-ストレプトマイシン - 10,000単位のペニシリンと10 mgのストレプトマイシン/mLを含む安定化溶液、滅菌ろ過、バイオ試薬、細胞培養に最適	組織培養培地用	グマ	F9665
PBS	シグマ	D8537
プラスチック製品
24ウェルプレート	Greiner	662160
装置
組織培養施設
マルチチャンネルピペット

培養宿 ウシサプリメント