マグネトスピリラム菌の増殖とその磁気移動性挙動の評価

要約

出典: Le Nagard, L., et al.マグネトスピリルム属の増殖する走磁性細菌 MSR‐1,AMB‐1,MS‐1株J. Vis. 経験。(2018)。

このビデオでは、液体培地と半固体培地の両方を使用して、微好気性条件下でマグネトスピリラム菌を培養する方法を示します。これは、酸素と無酸素の界面での目に見える細菌バンドの形成と、酸素が枯渇するにつれてその上向きの移動を強調しています。このビデオでは、磁場に応答して指向性泳泳を観察することにより、走磁性挙動を評価する方法も示しています。

プロトコル

1.走磁性細菌(MTB)の接種注

:株AMB-1、MS-1、およびMSR-1の培養は、市販的に入手できます(材料表)。

注意: 次のすべての手順は、ブンゼンバーナーの炎の下で、無菌状態で実行してください。

1. MSR-1、AMB-1、およびMS-1株の液体培地への接種
   空
   1. の125 mL血清ボトルをブチルゴム栓とアルミニウム圧着シールで密封します。栓を通してボトルに2本の針を挿入し、そのうちの1本に注射器を接続します。N₂ステーションに使用されているのと同じタイプのチューブを介して、シリンジをO₂のシリンダーに接続します。
   2. O₂をボトルに約30分間流して、ボトル内のすべての空気がO₂に置き換わるようにします。両方の針を取り外し、ボトルにわずかな過圧をかけてから、オートクレーブします。使用前にボトルを室温まで冷ましてください。
      注:時間を節約するために、培地の調製中にステップ1.1.1および1.1.2を実行し、培地またはストック溶液と一緒にボトルをオートクレーブします。
   3. 新鮮なミディアムボトルとO₂ボトルの両方のストッパーの上部を、70%エタノール溶液の液滴を数滴塗布し、ブンゼンバーナーの炎に通
   して滅菌します。
   4. 滅菌シリンジと針を使用して、O₂ ボトルから 1 mL の O₂ を抽出し、新鮮な培地ボトルに移します。このステップでは、注射器内に空気が入らないように、針が注射器にしっかりとフィットしていることを確認してください。
   5. ガラス瓶で培養した別の培養物からの接種物を使用する場合は、新鮮な培地ボトルと古い培養ボトルの両方のストッパーを、その上に70%エタノール溶液の液滴を数滴塗布し、ブンゼンバーナーの炎に通して滅菌します。凍結培養物のチューブからの接種物を使用する場合は、チューブをブンゼンバーナーの炎の下で密封して室温まで温めます。
   6. ガラス瓶で培養した別の培養物からの接種物を使用する場合は、1 mLの古い培養物を新鮮な培地に接種します。冷凍ストックからの接種液を使用する場合は、凍結プロセスで使用されるグリセロールまたはジメチルスルホキシド(DMSO)を希釈するために0.1 mLのみを接種してください。どちらの場合も、滅菌針と滅菌注射器を使用してください。
   7. 培養物を32°Cでインキュベートし、4〜7日後に新鮮な培地に接種します。
2. O₂勾配半固体培地へのMSR-1の接種
   1. 新鮮な培地のチューブが、ピンクから無色の界面によって具体化された、明確に定義された酸素-無酸素界面(OAI)を示していることを確認します。
   2. 接種物が別のO₂濃度勾配半固体培養物から来ている場合は、細菌によって形成されたバンドに滅菌ピペットチップを置いて50 μLの培養物をピペッティングして細菌を収穫します。これらの細菌を新鮮な培地(ピンク/無色の界面)のOAIにゆっくりと接種し、界面を乱さないようにします。接種物が凍結培養物から来ている場合は、代わりに100 μLの接種物で同じ方法で進めます。
   3. チューブを密封し、バクテリアを25°Cから30°Cの間で増殖させます。バクテリアのバンドが培地の表面に到達する前に、同じ手順を使用して新鮮な培地に移します。

2. 細菌の観察

培養

1. ボトルの栓の上に70%エタノール溶液を塗布し、ブンゼンバーナーの炎に通して滅菌します。半固体媒体の場合は、ブンゼンバーナーの炎の下でチューブを開きます。滅菌針と滅菌注射器を使用して細菌を抽出します。
2. ハンギングドロップ法8を使用して、細菌が磁性と運動性の両方であることを確認します。
   注:位相差顕微鏡は優れた結果をもたらしますが、必須ではありません。10倍から60倍の範囲の倍率が適しています。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
AMB-1	American Type Culture Collection (ATCC)	ATCC 700264
MS-1	ATCC ATCC	31632
MSR-1	Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ)	DSM 6361
L-システイン.HCl.H₂O	シグマ・アルドリッチ	C7880-100G
1.0 mL シリンジ	フィッシャー サイエンティフィ	B309659
25G x 1 針	BD	305125
125 mL 血清ボトル	ウィートン	223748
20 mm アルミニウム シール	ウィートン	224223-01
20 mmE-Z クリンパー	ウィートン	W225303
ブチルゴム栓	ベルコグラス株式会社	2048-11800
ハンゲート チューブ	ケムグラス (VWR)	CLS-4208-01
セプタム ストッパー、13mm、ハンゲート	ベルコ グラス、株式会社	2047-11600
ガラス培養チューブコー	ニング (VWR)	9826-16X

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