硫化水素産生細菌の検出のための高感度視覚的方法

要約

出典: Zhu、W.、およびChu、W.硫化水素生成細菌を検出するための高感度視覚的方法。 J. Vis. 経験。 (2022年)

このビデオでは、硫化水素を生成する細菌を迅速に検出するための高感度の視覚的方法を示します。黄色から黒への色の変化は、硫化ビスマスの形成による細菌の活動を示しています。

プロトコル

1.細菌株

手記：この実験では、サルモネラ・パラチフスA、サルモネラ・パラチフスB、フソバクテリウム・ヌクレアタム、エンテロコッカス・フェカリス、黄色ブドウ球菌、緑膿菌PAO1、エアロモナス・ハイドロフィラYJ-1、プロテウス・ブイガリス、肺炎桿菌を含む9つの標準株を使用しました。サルモネラ・パラチフスA、Fusobacterium nucleatum、緑膿菌、およびProteus vuigarisはH₂Sを生成できます。

1. 細菌培養の調製
   1. サルモネラ・パラチフスA、サルモネラ・パラチフスB、エンテロコッカス・フェカリス、黄色ブドウ球菌、緑膿菌PAO1、エアロモナス・ハイドロフィラYJ-1、および肺炎桿菌の1つの細菌コロニーをルリア・ベルタニ(LB)寒天プレートから100 mLのLB培地に移し、細菌濃度が約1 x 10⁹細胞/mLになるまで37°Cで12〜16時間培養します(OD₆₀₀で示される= 1) です。
   2. Fusobacterium nucleatumおよびProteus vuigarisの1つの細菌コロニーをトリプチカーゼ大豆ブロス(TSB)寒天プレートから100 mLのTSB培地に移し、細菌濃度が約1 x 10⁹細胞/ mLになるまで37°Cで24時間嫌気的に培養します(OD₆₀₀ = 1で示されます)。

2. H₂S検出アッセイ

1. 硫化水素製造試験
   1. 100 μLの細菌培養物と100 μLの新しく調製したビスマス溶液(pH 8.0、10 mM塩化ビスマス(III)、0.4 Mトリエタノールアミン-HCl、20 mMピリドキサール5-リン酸一水和物、20 mM EDTA(エチレンジアミン四酢酸)、および40 mM L-システイン)を96ウェルマイクロタイタープレートに混合し、37°Cで20分間培養します。細菌株ごとに、3回に分けて分析を行います。
   2. 20分後、色の変化を確認します。溶液の色が淡黄色から黒に変わる場合、これは細菌がH₂Sを生成できることを示しています。この測定を3回繰り返します。
2. メソッドの感度
   1. BS(硫化ビスマス)溶液と混合した、2 mM、1 mM、0.8 mM、0.6 mM、0.4 mM、0.2 mM、0.1 mM、および0 mMの異なる濃度の硫化水素ナトリウム(NaHS)を使用して、分析法の感度を決定します。
   2. 黒色のBS沈殿物の形成を観察することにより、^HS−/S²⁻ の存在を決定します。色の生成なし (-) から最も暗い黒色の生成 (++++++) までの視覚的なスケールを使用して、ウェルの色をスコアリングします。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
塩化ビスマス(III)	上海マックリン生化学有限公司	7787-60-2
EDTAの	南京化学試薬有限公司	60-00-4
フソバクテリウム・ヌクレアタム	ATCCの	25586
L-システイン	アムレスコ	52-90-4
トリエタノールアミン-HCl	上海アラジン生化学技術有限公司	637-39-8
硫化水素ナトリウム
ピペット