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1.細菌株
手記：この実験では、サルモネラ・パラチフスA、サルモネラ・パラチフスB、フソバクテリウム・ヌクレアタム、エンテロコッカス・フェカリス、黄色ブドウ球菌、緑膿菌PAO1、エアロモナス・ハイドロフィラYJ-1、プロテウス・ブイガリス、肺炎桿菌を含む9つの標準株を使用しました。サルモネラ・パラチフスA、Fusobacterium nucleatum、緑膿菌、およびProteus vuigarisはH2Sを生成できます。
- 細菌培養の調製
- サルモネラ・パラチフスA、サルモネラ・パラチフスB、エンテロコッカス・フェカリス、黄色ブドウ球菌、緑膿菌PAO1、エアロモナス・ハイドロフィラYJ-1、および肺炎桿菌の1つの細菌コロニーをルリア・ベルタニ(LB)寒天プレートから100 mLのLB培地に移し、細菌濃度が約1 x 109細胞/mLになるまで37°Cで12〜16時間培養します(OD600で示される= 1) です。
- Fusobacterium nucleatumおよびProteus vuigarisの1つの細菌コロニーをトリプチカーゼ大豆ブロス(TSB)寒天プレートから100 mLのTSB培地に移し、細菌濃度が約1 x 109細胞/ mLになるまで37°Cで24時間嫌気的に培養します(OD600 = 1で示されます)。
2. H2S検出アッセイ
- 硫化水素製造試験
- 100 μLの細菌培養物と100 μLの新しく調製したビスマス溶液(pH 8.0、10 mM塩化ビスマス(III)、0.4 Mトリエタノールアミン-HCl、20 mMピリドキサール5-リン酸一水和物、20 mM EDTA(エチレンジアミン四酢酸)、および40 mM L-システイン)を96ウェルマイクロタイタープレートに混合し、37°Cで20分間培養します。細菌株ごとに、3回に分けて分析を行います。
- 20分後、色の変化を確認します。溶液の色が淡黄色から黒に変わる場合、これは細菌がH2Sを生成できることを示しています。この測定を3回繰り返します。
- メソッドの感度
- BS(硫化ビスマス)溶液と混合した、2 mM、1 mM、0.8 mM、0.6 mM、0.4 mM、0.2 mM、0.1 mM、および0 mMの異なる濃度の硫化水素ナトリウム(NaHS)を使用して、分析法の感度を決定します。
- 黒色のBS沈殿物の形成を観察することにより、HS−/S2− の存在を決定します。色の生成なし (-) から最も暗い黒色の生成 (++++++) までの視覚的なスケールを使用して、ウェルの色をスコアリングします。