ビブリオ種の迅速な検出のための新しい発色培地

要約

出典:Yeung、M.、et al。Vibrio parahaemolyticusと他のVibrio種の検出のためのより高感度で特異的な発色寒天培地の開発J. Vis. 経験。(2016年)

このビデオでは、 ビブリオ 種を同定するための培養ベースの方法を示し、一般的に使用されるチオ硫酸塩-クエン酸-胆汁酸塩-スクロースまたはTCBS寒天培地のより正確な代替品として発色寒天を強調しています。発色寒天培地は、種特異的な酵素活性を検出することにより、 ビブリオ 株の優れた分化を提供します。

プロトコル

選択的および微分培地での成長

1. 実験の2〜4日前に、コロニー単離のために非選択的培地(TSAS、BHI、またはチョコレート寒天)にすべての微生物株をストリークします。プレートを35〜37°Cで48時間インキュベートします。インキュベーション後のコロニー形態を観察することにより、培養物の純度をチェックします。純粋な培養物は、同様のコロニー形態を示すコロニーを生成するはずです。
2. いくつかの単離されたコロニーを5mlのブロスに移します。チューブを35〜37°Cで16〜24時間インキュベートします。

手記： 生後4日未満の若いコロニーを使用して、すべての実験で一晩培養を準備します。

3. コロニー単離のために、選択的および異なる培地(TCBSおよび発色寒天)で一晩培養のループをストリークします。プレートを35〜37°Cで最大96時間インキュベートします。
4. プレート上の培養密度と単離されたコロニーのサイズの両方を調べることにより、すべての株の全体的な成長を記録します。周囲光や紫外線下でのコロニーの色を記録します。標高、マージン、フォームなど、孤立したコロニーの他の特性に注目してください。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
試薬・機器
寒天	フィッシャーサイエンティフィック	DF0140-15-4	他のブランドを使用する可能性があります
BHIパウダー	フィッシャーサイエンティフィック	DF0418-17-7	他のブランドを使用する可能性があります
CampyGenガス発生器	ハーディ診断	CN035A型	微好気性雰囲気を提供する。他のブランドを使用する可能性があります
チョコレート寒天プレート	ハーディ診断	E14	他のブランドを使用する可能性があります
培養チューブ	フィッシャーサイエンティフィック	S50712	他のブランドを使用する可能性があります
HardyChrom ビブリオ寒天プレート	ハーディ診断	G319型	この研究では、この媒体を評価します
孵卵器	任意
ループの接種	フィッシャーサイエンティフィック	22-363-606	この研究では 10 マイクロリットル サイズを使用しました
ペトリ皿	フィッシャーサイエンティフィック	FB0875713	他のブランドを使用する可能性があります
ピペットとチップ	滅菌されたチップ
TCBSパウダー	ハーディ診断	265020	この研究では、この媒体を評価します
TSBパウダー	フィッシャーサイエンティフィック	DF0370-07-5	他のブランドを使用する可能性があります
UVビューイングキャビネット	任意		長波紫外線を放射する
ウォーターバス	任意
細菌種と菌株
エアロモナス・ハイドロフィラ	ATCCの
カンジダ	ATCCの
カンピロバクター・ジェジュニ	ATCCの
大腸菌	ATCCの
プロテウス・ミラビリス	ATCCの
緑膿菌	ATCCの
黄色 ブドウ 球菌	ATCCの
サルモネラ・コレラスイス	ATCCの
赤痢菌ボイディ	ATCCの
赤痢菌フレックスネリ	ATCCの
赤痢菌ソンネイ	ATCCの
溶骨ビブリオ	ATCCの
V. コレラ (血清型には、O139、O1、非 O1、El Tor バイオバールが含まれます)	FDA、ATCC
V.ダムセラ	FDAの
V.フィシェリ	環境
V.フルビアリス	疾病管理予防センター
V.ファーニッシイ	疾病管理予防センター
V.ホリサエ	FDAの
V.メトシュニコビ	ATCCの
V.ミミカス	FDAの
V. parahaemolyticus (血清型には、O3:K6、O1:K56、O4:K8、O5:K15、O8 などが含まれます)	ATCC, FDA, CDC, 環境
V.タンパク質分解	FDAの
V.ブルニフィカス	FDAの