トマトの細菌耐性をスクリーニングするための苗の洪水アッセイ

要約

出典:Hassan、JA、et al.Pseudomonas syringae pvに対する耐性のハイスループット同定苗フラッドアッセイを用いたトマト中のトマトJ. Vis. 経験。 (2020)。

このビデオでは、細菌懸濁液を接種した生後10日の苗木を使用して、さまざまなトマト株の細菌耐性をスクリーニングする方法を示します。細菌が気孔から侵入し、エフェクタータンパク質を送達して植物の免疫を抑制する方法と、感受性株と耐性株の間で植物の反応がどのように異なるかを説明しています。結果は、目に見える成長の違いを観察することによって評価され、耐性植物は健康なままで、感受性植物は組織損傷を示します。

プロトコル

1.トマト苗氾濫法

1. 生後10日の苗の入ったプレートを成長チャンバーから取り出し、バイオセーフティキャビネットに入れて、プレートを洪水に備えます。
2. 2枚のプレートからサージカルテープをはがします。
3. タイマーを3分間に設定します。P . syringae pv の最終接種物 6 mL を測定します。 トマト (Pst)(Pst19 OD₆₀₀ = 0.0075または PstDC3000 OD₆₀₀ = 0.005)と、10日齢の苗で各プレートに6 mLの接種物を移します。
4. 滅菌ピペットチップで苗木を接種物にそっと押し込みます。タイマーを開始します。
5. 両手に1枚ずつのプレートを持ちます。プレートの前面を下に傾けて接種物を蓄積し、主に子葉と苗の葉を沈めます。
6. 左右に5〜7回スウィッシュしてから、プレートを後ろに傾けて根元とプレート全体を覆います。
7. プレートを再び下に傾けて子葉と葉を沈め、合計3分間繰り返します。
8. 接種物をプレートから注ぎ、プレートを平らな面に置き、残りの接種物をもう一度注ぎます。
9. プレートをサージカルテープで包み直し、残りのプレートについて手順1.2〜1.8を繰り返します。
10. すべてのプレートが浸水した後、成長チャンバー内でプレートを再インキュベートします。

PstDC3000の場合は7〜10日後、Pst19の場合は10〜14日後の表現型。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
バイオセーフティキャビネット、クラスIIタイプA2
ブランド使い捨てプラスチックキュベット、ポリスチレン	VWRインターナショナル	47744-642
シェニールクラフトフラットウッドつまようじ	VWRインターナショナル	500029-808
ガラスアルコールバーナー芯	フィッシャーサイエンティフィック	S41898A/いいえW-125
ガラスアルコールバーナー	フィッシャーサイエンティフィック	S41898 / 番号BO125
グリセロールACS試薬	VWRインターナショナル	EMGX0185-5
Kimberly-Clark™ Kimtech Science™ Kimwipes™ デリケート タスク ワイパー	フィッシャーサイエンティフィック	06-666-A
塩化マグネシウム、ACSグレード	VWRインターナショナル	97061-356
硫酸マグネシウム七水和物、ACSグレード	VWRインターナショナル	97062-130
マイクロ遠心チューブ、1.5 mL
マイクロ遠心チューブ、2.2 mL
ムラシゲ&スクーグ、基塩	ケイソンラボラトリーズ株式会社	MSP01-50LT型
Pipet-Lite XLS LTS 8-CHピペット 20-200uL	レイニン	L8-200XLS製
Pipet-Lite XLS LTS 8-CHピペット 2-20uL	レイニン	L8-20XLSの
ポリスチレン 100mm x 25mm 滅菌シャーレ	VWRインターナショナル	89107-632
ポリスチレン 150mm x 15mm 滅菌シャーレ	フィッシャーサイエンティフィック	FB08-757-14
ポリスチレン150x15mm滅菌シャーレ	フィッシャーサイエンティフィック	08-757-148
チップ LTS 20 μL 960/10 GPS-L10	レイニン	17005091
チップ LTS 250 μL 960/10 GPS-L250	レイニン	17005093