出典: Liu、PC 他。 抗生物質薬剤選択下における細菌の適応進化のための低コスト自動モルビドスタットの設計と利用 J. Vis. 経験。 (2016年)
このビデオでは、マイクロ流体チップを使用して、トリメトプリム抗生物質ストレス下での野生型およびトリメトプリム耐性 大腸菌 株の増殖と形態を視覚化し、比較する方法を示します。
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方法論記事
抗生物質薬剤耐性を研究するためのマイクロ流体チップ上の細菌増殖
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2025年9月26日
この記事について
要約
プロトコル
1. オンチップ成長実験
- マイクロ流体装置にロードする前に、脱イオン水で1時間、M9培地で1時間洗い流します。
- 毎日凍結したサンプルを室温で5分間解凍し、新しい試験管に新鮮なM9培地を接種します。サンプルを37°Cのシェーカーインキュベーターに一晩置きます。
- 微生物サンプルをM9培地で10倍に希釈し、微生物サンプル容器を5psiで加圧してマイクロ流体デバイスにロードします。次に、薬物培地容器を5 psiで加圧して、トリメトプリム(TMP)薬物培地をチップにロードします。マイクロ流体チップ上の2つのチャンバー間のマイクロメカニカルバルブを15分間作動させることにより、微生物と薬物の混合を実行します。
- マイクロ流体チップを倒立顕微鏡に取り付けられた顕微鏡インキュベーターに入れます。倒立顕微鏡に取り付けられたCCDカメラを使用して、成長チャンバー内の細胞画像を8時間ごとに取得します。
- カスタムプログラムスクリプトを使用して、セル画像データのしきい値アルゴリズムを使用してセル番号を計算します。細胞数データは、通常、3つのマイクロ流体チャンバーで平均化されることに注意してください。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 倒立顕微鏡 | ライカマイクロシステムズ | ライカDMI-LED | マイクロ流体測定に使用 X40対物レンズを使用 NA=0.55 |
| 顕微鏡インキュベーター | ライブセル装置 | CU-109 | マイクロ流体測定に使用 |
| 電磁弁 | ニューマダイン | S10MM-31-12-3 | ノーマルオープン 1.3 ワット 12 Vdc |
| USBインターフェースカード | 趣味エンジニアリング | USBIO24-RデジタルI/Oモジュール | マイクロ流体測定用 |
| エアコンプレッサー | ロッカーサイエンティフィック | ロッカー 440 | マイクロ流体用圧力源 最大圧力 80 psi |
| 1/8インチバーブへのオスルアーロックフィッティング | ValuePlastics.com | MTLL230-1 | マイクロ流体制御に使用 |
| 1/8インチバーブから10-32ネジポート | ValuePlastics.com | B-1 | マイクロ流体制御に使用 |
| 10-32ネジポートへのメスルアーロックフィッティング | ValuePlastics.com | KFTL-1 | マイクロ流体制御に使用 |
| NPNダーリントントランジスタ500mA、40V(2N6427) | DigiKey.com | 2N6427GOS-ND | マイクロ流体制御に使用 |
| 10kΩ、カーボンフィルム抵抗器、0.25W | DigiKey.com | P10KBACT-ND | マイクロ流体制御に使用 |
| タンタルコンデンサ、10uF、25V、10% | DigiKey.com | 478-1841-ND | マイクロ流体制御に使用 |
| アンドールCCDカメラ | アンドール | Zyla 4.2 Plus SCMOS | マイクロ流体オンチップイメージングに使用 |
| トリメトプリム | シグマ | ||
| Difco M9 ミニマルソルト 5x | BDの | 中程度 |
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