出典:Bhaduri、S.、et al.、Sporosarcina pasteuriiによって媒介される微生物学的に誘発された方解石沈殿。J. Vis。 (2016年)
このビデオでは、 スポロサルシナ・パスツリを 尿素と塩化カルシウムで濃縮してウレアーゼ活性を引き起こし、微生物学的に誘発された方解石沈殿(MICP)によって目に見える方解石結晶を形成する方法を示します。
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方法論記事
Sporosarcina pasteuriiによる微生物学的誘発方解石沈殿
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2025年9月26日
この記事について
要約
プロトコル
1. 沈殿を促進するための栄養素の濃縮のためのプロトコル
- 調製した培養液(細胞+培地)9mlを、それぞれ10ml容量のいくつかの滅菌遠心分離管に移します。
- 新鮮な培地中で、次の濃度の4つの成分からなる外部濃縮の100mlストック溶液を調製します:尿素:2 g / L、塩化アンモニウム:1 g / L、重炭酸ナトリウム:212 mg / L、塩化カルシウム:280 mg / L。分析天びんを使用してすべての成分を注意深く測定し、尿素を除くすべての成分をビーカー内の新鮮な培地と混合し、オートクレーブ(121°C、 15 psi、15分)。
- オートクレーブに続いて、必要な量の尿素(2 mg)を1 mlの新鮮な培地と混合し、0.22 μmのシリンジフィルターを取り付けたシリンジに通して濃縮プロセスを完了します。
- 調製した培養液(細胞+培地)9mlを含む滅菌遠心分離管に、添加剤を含むこの濃縮培地1mlを加えます。
手記： 尿素は高温で分解性があるため、オートクレーブでは滅菌できない。したがって、他の成分がオートクレーブ滅菌された後(121 °C、15 psi、15分)、尿素は最後に0.22 μmのシリンジフィルターを通して添加されます。
- 機械式ボルテキサーを使用して各チューブを徹底的にボルテックスします。濃縮液体(細胞+培地+添加剤)を30°Cの非振とうインキュベーターに入れます。沈殿の開始についてすべてのユニットを定期的に監視します。光学顕微鏡を使用して、肉眼で降水の開始が検出されたら顕微鏡観察を開始します。これは通常、実験開始後30〜36時間です。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| パイレックスフラスコ | フィッシャーサイエンティフィック | S63268 | コーニング・エアレンマイヤー |
| 測定シリンダー | コール・パーマー | CP08559GC | Cole-Parmer クラス A メスシリンダー Cal Cert、TC 付き。1000 mL、1/パック |
| 分析天びん | オハウス | AX124E型 | 試薬の重量測定に用いられるもの |
| オートクレーブ | ブリンクマン | 58619000 | |
| オートクレーブテープ | VWRの | 52428864 | |
| アルミホイル | シグマ・アルドリッチ | Z185140 | フラスコをオートクレーブに入れる前にフラスコを密封するために使用される |
| 細菌ストック | シダーレーン | 11859 | -80°Cストック S . pasteurii、ATCC番号。キャットに対して言及されています。いいえ。 |
| Mlineシングルチャンネル機械式ピペッター、可変容量 | バイオヒット | 725010 | VWRによってカタログ番号14005976で販売されています |
| マイクロピペットチップ | フィッシャーサイエンティフィック | 212772B | 寒天プレートの引っかき傷に使用 |
| 孵卵器 | バインダー | 80079098 | 微生物学インキュベーター、BFシリーズ |
| 振とうインキュベーター | VWRの | 14004300 | VWR シグネチャー ベンチトップ シェイキング インキュベーター |
| パラフィルム | シグマ・アルドリッチ | P7793 | 寒天プレートの密封に使用される |
| 尿素 | シグマ・アルドリッチ | U1250 | 栄養培地の濃縮 |
| 炭酸水素ナトリウム | シグマ・アルドリッチ | S8875 | 栄養培地の濃縮 |
| 塩化カルシウム | シグマ・アルドリッチ | C1016 | 栄養培地の濃縮 |
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