C.エレガンスノックダウンをスクリーニングするためのマルチウェル液体ベースのアッセイ

Abstract

出典: アンダーソン、Q.L. 他。 ハイスループット,高含有量,液体ベースの C.エレガンス 病態系 J. Vis. 経験。 (2018年)

このビデオでは、 Caenorhabditis elegans を使用して、宿主と病原体の相互作用中の遺伝子ノックダウンを研究するハイスループットスクリーニング方法を示します。ノックダウンワームを調製し、アッセイプレートに移して、病原体誘発性ワーム殺滅の効果を評価する手順を概説します。

Protocol

1. 複数の Caenorhabditis elegans 株またはノックダウンのスクリーニングのための適応 (リボ核酸干渉 (RNAi) スクリーニングのセットアップ)

手記： これは、24ウェルプレートセットアップ用に記述されたRNAiスクリーニングです。

1. RNAiを播種したワームを含む24ウェルプレートのウェルあたり1 mLのS Basalを追加します。プレートを振ってワームを穏やかに撹拌し、ワームを空の滅菌24ディープウェルプレートに移します。ワームが重力によって落ち着くのを待ちます(~5分)。
2. 上清を吸引し、約1mLを残します。各ウェルに7 mLのS基礎を加えます。
3. 手順1.1〜1.2を少なくとも2回繰り返します。最終洗浄後、上清を吸引し、約400 μLを残します。
4. ワームソーターのリサンプラー機能を使用して、24ウェルプレートワーム懸濁液から22本のワームを384ウェルプレートの各ウェルに選別します(24ウェルプレートの各ウェルは、384ウェルプレートの8〜12ウェルを生成します)。
   1. 飢餓を避けるために、選別する前に細菌を384ウェルプレート(OP50などの食物としてのみ機能する菌株、または病原性菌株)にピペットで入れます。
5. ワームを384ウェルプレートに選別した後、小分子またはその他の実験固有の材料を追加します。

Materials