細菌の胞子発芽中の皮質分解の比色検出

要約

出典: フランシス、MB、 他。細菌胞子発芽中の皮質断片の検出 J. Vis. 経験。 (2016)。

このビデオでは、時間の経過に伴う還元糖の放出を測定することにより、細菌の胞子発芽中の皮質分解を検出する比色法を示します。このアッセイは、N-アセチルグルコサミン標準試料と時点サンプルを使用して、紫色の発色反応を通じて糖濃度を定量し、皮質の加水分解の程度を示します。

プロトコル

1. カラー試薬

1. サンプルを氷上に置いている間に、カラー試薬を準備します。0.320 g の p-ジメチルアミノベンズアルデヒド (DMAB;エールリッヒ試薬)を1.9mlの氷酢酸に含めます。
   手記： 試薬は時間、温度、光に敏感であるため、事前に作成しないでください。
2. DMABが完全に溶解したら、100 μlの10 N HClを加え、ボルテックスします。
3. 氷酢酸5mlを加えてボルテックスします。

2. 比色反応

1. 冷却された各皮質サンプル100 μlを新しい1.5 ml微量遠心チューブに移します。
2. 各サンプルに700 μlの新たに調製したカラー溶液を加えます。
3. すぐにサンプルを37°Cのウォーターバスに移し、正確に20分間インキュベートします。
4. 各サンプル200 μlを透明な96ウェルプレートに移します。
5. プレートリーダーで585 nmでサンプルを定量します。サンプルは黄色から始まり、陽性反応は紫色に変わります。皮質が存在するほど、紫色は濃くなります。

材料