出典: フランシス、MB、 他。細菌胞子発芽中の皮質断片の検出 J. Vis. 経験。 (2016)。
このビデオでは、時間の経過に伴う還元糖の放出を測定することにより、細菌の胞子発芽中の皮質分解を検出する比色法を示します。このアッセイは、N-アセチルグルコサミン標準試料と時点サンプルを使用して、紫色の発色反応を通じて糖濃度を定量し、皮質の加水分解の程度を示します。
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方法論記事
細菌の胞子発芽中の皮質分解の比色検出
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2025年9月26日
この記事について
要約
プロトコル
1. カラー試薬
- サンプルを氷上に置いている間に、カラー試薬を準備します。0.320 g の p-ジメチルアミノベンズアルデヒド (DMAB;エールリッヒ試薬)を1.9mlの氷酢酸に含めます。
手記： 試薬は時間、温度、光に敏感であるため、事前に作成しないでください。 - DMABが完全に溶解したら、100 μlの10 N HClを加え、ボルテックスします。
- 氷酢酸5mlを加えてボルテックスします。
2. 比色反応
- 冷却された各皮質サンプル100 μlを新しい1.5 ml微量遠心チューブに移します。
- 各サンプルに700 μlの新たに調製したカラー溶液を加えます。
- すぐにサンプルを37°Cのウォーターバスに移し、正確に20分間インキュベートします。
- 各サンプル200 μlを透明な96ウェルプレートに移します。
- プレートリーダーで585 nmでサンプルを定量します。サンプルは黄色から始まり、陽性反応は紫色に変わります。皮質が存在するほど、紫色は濃くなります。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 2.0 mLスクリューキャップチューブ | 米国科学 | 1420-3700 | |
| P1000 エッペンドルフピペット | エッペンドルフ | ||
| P200 エッペンドルフピペット | エッペンドルフ | ||
| P20 エッペンドルフピペット | エッペンドルフ | ||
| 100-1250uLピペットチップ | VWRの | 89079-486 | |
| 1-200uLピペットチップ | VWRの | 89079-458 | |
| N-アセチル-D-グルコサミン | シグマ | A3286-25G型 | |
| 無水酢酸 | アルファ エザール | L04295 | |
| 炭酸水素ナトリウム | BDHの | BDH0280-500G | |
| 四ホウ酸カリウム四水和物 | アルファ エザール | 39435 | |
| 水酸化ナトリウム | BDHの | BDH8019-500G | |
| 4-(ジメチルアミノ)ベンズアルデヒド | シグマ | 156477-100G | |
| スペクトラマックス M3 | 分子デバイス | ||
| 酢酸、氷河 | BDHの | BDH3098-3.8LP | |
| 加熱式循環水浴 | VWRサイエンティフィック | モデル 1136 | |
| マイクロテスト 96 | 隼 | 353072 | |
| 培養チューブ | VWRの | 89000-506 | 96 ウェルクリア組織培養プレート |
| ヒートブロック | |||
| ボルテックスマシン | |||
