マイクロ流体パターニングと蛍光に基づく単一細胞細菌増殖の追跡

Abstract

出典: Pioli、R.、 et al.、 シーケンシャルキャピラリティアシストアセンブリによる微生物と微粒子のパターニング。 J. Vis. 経験。 (2021年)

このビデオでは、カーボンフリー懸濁液と制御されたフローを使用して、マイクロ流体トラップで単一の蛍光タグ付き 大腸菌(大腸菌) 細胞を捕捉し、続いて栄養素を添加して成長とマイクロコロニーの蛍光イメージングを誘発する方法を示します。

Protocol

1. 細菌のパターニング

1. 実験の1日前に、大 腸菌 (MG1655 prpsM-GFP株)の集団を増殖させます。凍結ストックから直接培養物を接種し、37°Cのシェーカーインキュベーターで溶原性ブロス(LB)培地で20時間一晩増殖させます。細胞に50 μg/mLのカナマイシンを加えて、prpsM-GFP(緑色蛍光タンパク質)プラスミドを保持します。
2. 実験当日、実験の数時間前にボックスインキュベーター(図1A)を37°Cに設定し、開始前に均一で安定した温度を確保します。次に、シリンジポンプと加熱されたガラス板を顕微鏡ステージにセットアップし(図1B、C)、ボックスインキュベーターと同じ温度に温度を設定します。
   手記： 顕微鏡を含むシステム全体(図1E)が封入されたボックスインキュベーターは、チャネルが培地で洗い流されたときに、実験全体を通して均一で一定の温度が維持されることを保証します。
3. 実験の90分前に、マイクロ流体チップを100%エタノール(EtOH)で満たされた容器に入れ、チャネルを100%EtOHで少なくとも10分間洗い流します。マイクロ流体チップを真空デシケーターに入れ、少なくとも30分間脱気します。EtOHを蒸留水と交換し、チップを少なくとも30分間真空処理します。マイクロ流体チップを70°Cのオーブンに10分間入れて、....

Results

図1:マイクロ流体チャネルでの逐次毛細管支援アセンブリ用のプラットフォームの概略図。 (A)ボックスインキュベーター。ボックスインキュベーターは、マイクロ流体チャネル内で均一で一定の温度(ここでは30°C)を維持します。(B)液体懸濁液を充填したシリンジ。シリンジはシリンジポンプ(図示せず)によって制御され、パターニングプロセス中の液体の動きを制御するために使用されます。(C)加熱ガラス板。加熱されたガラス板はマイクロ流体チャネルの下に配置され、テンプレート全体で均一な温度(こ.......

Materials