in vitro植物と微生物の相互作用をエミュレートするための植物根滲出液による細菌の処理

要約

出典: Yi、Y.、 et al.植物と微生物の相互作用 ジャガイモの根の滲出液に対するBacillus mycoidesの転写応答 J. Vis. 経験。 (2018年)

このビデオでは、植物と微生物の相互作用を研究するためのBacillus mycoides培養物の調製と処理を示します。ストック培養物をストリークして液体培地でインキュベートするまでの手順を概説し、攪拌下で細菌を植物の根の滲出液にさらします。このプロセスは、滲出液によって誘発される遺伝子発現変化のその後の分析のために、細菌細胞を採取して急速凍結することで最高潮に達します。

プロトコル

1. 増殖する細菌

1. B . mycoides 株を-80°CのグリセロールストックからLuria-Bertani(LB)寒天プレートにストリークし、プレートを30°Cで一晩インキュベートします。

2. LB液体培地にプレートからの単一のコロニーを接種し、振とうインキュベーターで200 rpmで一晩培養します。
30°Cです。

2. 細菌の処理とサンプリング

1.根の滲出液で処理した細菌の増殖曲線を陰性対照と比較するには、50 mLのLB液体培地を含む一連のフラスコを準備します。すべてのフラスコに0.5 mLの一晩細菌培養物を加え、それぞれ0%、5%、10%、または15%(v / v)の根の滲出液または滅菌脱イオン水を培地に加えます。

2.対照として、根の滲出液の代わりに脱イオン水を含む培養物を使用します。その後、1時間ごとに600 nm(OD₆₀₀)での光学密度を測定します。OD₆₀₀ の値と時間をプロットして成長曲線を生成します。

3. 一晩の B.mycoides 培養物を90 mLの予熱したLB培地で300 mLフラスコで初期OD₆₀₀ ~0.05に希釈します。10 mLの根滲出液を培養物に加え、30°Cで1時間インキュベートします。

4. 10 mLの滅菌脱イオン水処理を対照として使用します。9,000 x g で4°Cで2分間遠心分離することにより、培養物から細胞を収集します。上清を廃棄し、すぐにペレットを液体窒素で凍結し、使用するまで-80°Cで保存します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
次亜塩素酸ナトリウム	シグマ	CASの: 7681-52-9	10-15%活性塩素
ルリア・ベルタニ(LB)ブロス
インキュベーター	ニューブランズウィックサイエンティフィック	イノーバ4000
分光 光度 計	サーモフィッシャーサイエンティフィック	ジェネシス20
液体窒素
ガラスビーズ	シグマ	G8893	0.5μm
スクリューキャップ付き2.0mlチューブ			RNaseフリー
1.5mlおよび2.0mlのエッペンドルフチューブ			RNaseフリー
遠心機	エッペンドルフ	5430