型別不可能なインフルエンザ菌の培養

要約

出典: Venuprasad, K. et al., 気道炎症を研究するためのマウスモデルにおける インフルエンザ菌 の気管内投与。 J. Vis. 経験。 (2016年)

このビデオでは、型付け不可能な インフルエンザ菌 の培養と、下流のコロニー形成または感染研究のための用量標準化された接種物の調製を示します。

プロトコル

1. 型別不可能なインフルエンザ菌(NTHi)の培養と接種物の調製

1. チョコレート寒天プレートにNTHiをプレートし、プレートを37°Cおよび5%CO₂で一晩加湿したCO₂インキュベーターで逆さまに保ちます。翌日、脳心臓注入ブロスで細菌を培養します。次に、滅菌1.5mlチューブに1mlのブロスを加えます。
2. 室温で4,000 x gで5分間遠心分離します。次に、上清を廃棄し、ペレットを1mlの滅菌1xリン酸緩衝生理食塩水(PBS)に再懸濁します。この手順を一度繰り返します。
3. 再懸濁溶液100 μlを900 μlの1x PBSに移し、分光光度計で600 nm波長で希釈培養物の吸光度を測定します。
4. チョコレート寒天プレート上で1:10の連続希釈液を培養し、37°Cおよび5%CO₂で一晩インキュベートすることにより、接種物の生存率およびコロニー形成単位(CFU)を決定します。
5. 前のステップで決定された生存率とCFUに基づいて、接種物を20 x 10⁶ CFU / mlの最終濃度に調整します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
チョコレート寒天プレート	フィッシャーサイエンティフィック	CAS50-99-7
1.5mlマイクロ遠心チューブ	ライトラボ	A-7001-R
PBSの1倍	ギブコ	10010-023