$$\rightleftharpoonup{xx}$$
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1. 型別不可能なインフルエンザ菌(NTHi)の培養と接種物の調製
- チョコレート寒天プレートにNTHiをプレートし、プレートを37°Cおよび5%CO2で一晩加湿したCO2インキュベーターで逆さまに保ちます。翌日、脳心臓注入ブロスで細菌を培養します。次に、滅菌1.5mlチューブに1mlのブロスを加えます。
- 室温で4,000 x gで5分間遠心分離します。次に、上清を廃棄し、ペレットを1mlの滅菌1xリン酸緩衝生理食塩水(PBS)に再懸濁します。この手順を一度繰り返します。
- 再懸濁溶液100 μlを900 μlの1x PBSに移し、分光光度計で600 nm波長で希釈培養物の吸光度を測定します。
- チョコレート寒天プレート上で1:10の連続希釈液を培養し、37°Cおよび5%CO2で一晩インキュベートすることにより、接種物の生存率およびコロニー形成単位(CFU)を決定します。
- 前のステップで決定された生存率とCFUに基づいて、接種物を20 x 106 CFU / mlの最終濃度に調整します。