型別不可能なインフルエンザ菌に感染したマウスモデルからの気管支肺胞洗浄液の採取

要約

出典: Venuprasad、K.、 et al。 気道炎症を研究するためのマウスモデルにおけるイン フルエンザ菌 の気管内投与。 J. Vis. 経験。 (2016年)

このビデオは、下流分析のために、型付け不可能な インフルエンザ菌 に感染した安楽死マウスからの気管支肺胞洗浄液の収集と処理を示しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 気管支肺胞洗浄液(BALF)コレクション
   1. 感染後24時間で子宮頸部脱臼によりマウスを犠牲にします。
   2. 解剖学的ハサミでマウスの腹腔を開き、腹側大動脈を切断して出血させ、肺の腹側部分を露出させます。
   3. 気管を露出させ、20ゲージのカテーテルで挿管します。0.8 mlのBALFバッファー(1x PBS(リン酸緩衝生理食塩水)、0.1%ブドウ糖、10 U / mlヘパリン)を点眼し、穏やかな吸引によって洗浄液を収集します。この手順を 3 回繰り返します。
   4. 100 μlのBALF懸濁液中の細胞の総数を、トリパンブルー染色で10倍の倍率で血球計を使用してカウントします。
   5. 修正ギムザ染色用のスライドを準備します。100 μlのBALFをサイトスピンの適切なウェルに分注し、500 x g で5分間遠心分離します。スライドを10分間乾燥させ、メーカーのプロトコルに従って改変ギムザ染色を使用して細胞を染色します。
   6. 残りの細胞は、蛍光活性化細胞選別(FACS)、共焦点顕微鏡、遺伝子発現、ウェスタンブロットなどの後続の分析に使用できます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
無水ブドウ糖	テモ・サイエンティフィック	R01300
ヘパリン	株式会社ホスピラ	RL-3010
シリンジニードル 20/26G	BDの	(175年REF305115月)
1mlシリンジ	BDの	参照309602
カテーテル 20GA	BDの	参照381433
ピンセット #5 ステンレススチール、長さ 11cm	ケントサイエンティフィック	INS600095
5mlポリスチレン丸底チューブ	BDの	参照352058
1.5mlマイクロ遠心チューブ	ライトラボ	A-7001-R
1X PBS(リン酸緩衝生理食塩水)	ギブコ	10010-023
RBC溶解バッファー(10X)	バイオレジェンド	420301