出典: Shivaiah、K.、 et al。 植物葉組織とシアノバクテリアからのプラストグロブ脂滴の単離 J. Vis. 経験。 (2022)。
このビデオでは、スクロース密度勾配遠心分離を使用してシアノバクテリアからプラストグロビュを単離し、脂質が豊富で低密度の性質を強調し、下流の分析のために構造を確実に保存します。
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方法論記事
シアノバクテリアプラストグロビュの密度勾配精製
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2025年9月26日
この記事について
要約
プロトコル
1.純粋なプラストグロビュルの採取
- シアノバクテリア加工
- ステップ1.3の粗プラストグロビュア500 μLを750 μLの培地R 0.7と混合し、次に750 μLの培地R 0.2でオーバーレイした4本の2.5 mL超遠心チューブでスクロース勾配を生成します (表1)
- スクロース勾配を150,000 x g で4°Cで90分間遠心分離します。純粋なプラストグロビエル (図1C) をシリンジと22 G針でスクロース勾配の上相から収集し、1.5 mLチューブに移します。
- 純粋なプラストグロビュルを分注し、液体窒素中で急速凍結します。-80°Cで直接保存するか、乾燥粉末に凍結乾燥します。
表1:シアノバクテリアからのプラストグロブール単離のためのバッファーレシピ。
| ミディアムR | 50 mM HEPES-KOH (pH 8.0) |
| 5 mM MgCl2 | |
| ミディアム R 0.2 | 50 mM HEPES-KOH (pH 8.0) |
| 5 mM MgCl2 | |
| 0.2 Mショ糖 | |
| ミディアム R 0.7 | 50 mM HEPES-KOH (pH 8.0) |
| 5 mM MgCl2 | |
| 0.7 Mショ糖 |
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結果
図1:プラストグロビュルとチラコイドの単離と免疫ブロッティング。 (A)スクロース勾配から抽出する前の Z.メイズ からの代表的な精製プラストグロブールサンプル。(B)スクロースクッションから抽出する前の乾燥した E.ニンデンシス からの代表的な粗プラストグロブールサンプル。(C) Synechocystis sp. PCC 6803か...
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| ヘペス | シグマ・アルドリッチ | H3375 | |
| 塩化マグネシウム | シグマ・アルドリッチ | M8266 | |
| 蔗糖 | シグマ・アルドリッチ | S9378 | |
| シネコシスチス属PCC 6803 | 該当なし | 該当なし | |
| Optima MAX-TL超遠心分離機 | ベックマン・コールター | A95761 |
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