Phormidium lacunaフィラメントにおける滑走運動性

要約

出典: Weber、N.、 et al.、 糸状シアノバクテリウム Phormidium lacunaの自然な形質転換、タンパク質発現、および凍結保存。 J. Vis. 経験。 (2022年)

このビデオでは、フィラメント培養物を均質化して均一な懸濁液を作成し、顕微鏡スライド上でペトリプレートアッセイセットアップを準備し、フィラメントの動きを視覚化することにより、 Phormidium lacuna の滑走運動性を評価する手順を示します。

プロトコル

1. 液体媒体中での移動のアッセイ
   1. 運動性を直接観察するには、 P.ラクナを含む 培地8 mLを6 cmのペトリ皿に移します。サンプルが室温に達するまで数分待ってから、ペトリ皿をセロハンホイルで覆います。
   2. カメラ付きの標準顕微鏡のx-yテーブルに顕微鏡スライドを置きます。顕微鏡ライトのスイッチを入れます。理想的には、照明には常に同じ電気的および光学的設定を使用します。4倍または10倍の対物レンズを光の経路に移動します。
   3. シャーレをスライドの上に置きます。テーブルのx、y、zの動きで単一のフィラメントまたはフィラメントバンドルを調整します。
      手記： 立体配置により、該当部分の一部のみに焦点を合わせることができます。セロハンホイルにより、制限なく焦点を調整できます。
   4. 単一のフィラメントまたは束の動きを観察します。対物レンズが液体に触れないようにしてください。標準的な顕微鏡カメラでフィラメントの動きを記録します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ガラス製品、異なる
顕微鏡 DM750	ツァイス
接眼カメラ MikrOkular Full HD	ブレッサー		タイムラプス録画用、Raspberry Piミニコンピュータと結合
ペトリ皿ポリスチロール、60 mm x 15 mm	メルク	P5481-500EA
ソフトウェア、URL
イメージJ		イマージュ処理用ソフトウェア(画素強度、円径)
培地
人工海水	0.41 M NaCl、53 mM MgCl₂、28 mM Na₂SO₄、10 mM CaCl₂、9 mM KCl、2.4 mM NaHCO₃、0.84 mM KBr、0.49 mM H3BO₃、90 μM SrCl₂、72 μM NaF
f/2 -液体媒体	人工海水、0.1%(v/v)微量元素溶液、0.05%(v/v)ビタミン溶液、0.88 mM NaNO₃、36 μM NaH₂PO₄
微量元素溶液	0.36 mM NaH₂PO₄、12 μM Na₂EDTA、39 nM CuSO₄、26 nM Na₂MoO₄、77 nM ZnSO₄、42 nM CoCl₂、0.91 μM MnCl₂
ビタミン溶液	0.3 μM チアミン-HCl、2.1 nM ビオチン、0.37 nM シアノコバラミン