熱ストレスラットにおける バチルス・サブティリス の効果を評価するための組織学的および血液学的解析

要約

出典:ソロクロワ、I.ら。Bacillus subtilis Strainによるラットにおける熱ストレスの有害影響予防。J. Vis. Exp. (2016)

このビデオでは、熱ストレスにさらされたラットにおける バチルス・サブティリス の保護効果を評価するために用いられる組織学的および血液顕微鏡分析を紹介します。

プロトコル

1. 組織学的分析

1. 各実験ラットから小腸サンプルを外科的手順で採取します。ブアンのフィクサティブに固定サンプルを固定し、パラフィンに埋め込み、標準手順でヘマトキシリンとエオシンで6μmの断片および染色を準備します。
2. 各サンプルの腸絨毛の高さと粘膜の総厚さ(倍率100倍)を測定するには高分解能顕微鏡システムを使用してください。1匹のラットから4つのサンプルを分析し、各サンプルで少なくとも20回の測定を行います。エクスプレスの結果はマイクロメートル単位で行われます。

2. 血液の高分解能光学顕微鏡

1. 振動遮断プラットフォームをベースに顕微鏡システムやビデオカメラ、コンピューターを設置し、ライブ画像を記録します。リチャードソンスライドを使ってテスト画像をキャリブレーションします。
2. 各ラットから採取した新鮮な血液7μlをガラススライドに置き、カバーを貼り、写真撮影×各サンプルに7253.3μm^² の画像フレームを10枚記録します(倍率1,700倍)。
3. 高解像度の直接表示光学画像をリアルタイムで提供するソフトウェアを使って小胞の濃度を測定します。各実験条件に対して最低20フレームの画像を検討します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
リン酸塩緩衝生理食塩水(PBS)	シグマ・オルドリッチ、セントルイス、ミズーリ州	P4417
ブアンのフィクサティブ	電子顕微鏡科学、ハットフィールド、ペンシルベニア州、アメリカ合衆国	15990
リチャードソンテストスライド	電子顕微鏡科学、ハットフィールド、ペンシルベニア州、アメリカ合衆国	80303
ソニーDXC-33ビデオカメラ	ソニー
光学顕微鏡光学系	シトビバ・テクノロジー社、オーバーン、アラバマ州
イメージプロプラスソフトウェア	メディア・サイバネティクス、MD、アメリカ合衆国