注射器を用いた圧力法による細胞外細菌の抽出

要約

出典: Rufián, J. S. ら、植物組織内の 緑膿菌シリンガ 遺伝子の発現の単細胞解析。 J. Vis. Exp. (2022年)

このビデオでは、細胞間空間であるアポプラスト内で増殖し、マイクロコロニーを形成する細胞膜細菌を抽出するための注射器ベースの圧力法を実演しています。この手法は、下流の単一細胞分析に適したデブリのない細菌サンプルを得られます。

プロトコル

アポプラストからの細菌の抽出

1. 接種から4日後、 シロイナナ の空中部分か豆の接種葉を切り取り、針なしで20mLの注射器に入れます(図2G)。豆の葉の場合は、葉を自身に巻きつけ、背面の面を外側に出します( 図2F参照)。
2. 組織を覆うほどの蒸留水(通常10〜15mL)を加えます。
3. プランジャーを挿入し、注射器を垂直にして先端を上に向けて、銃身を軽く叩いて注射器内の余分な空気や気泡を取り除き、すべての空気が先端近くに集中するまで調整します。プランジャーをスライドさせて空気を抜きます。注射器内の空気ができるだけ少なくなったら、注射器のバレルの先端をパラフィンフィルムで覆います。
4. プランジャーを慎重に押して正圧を作り、組織がより濃くなるまで続けます(図1Iおよび図2H)。次にプランジャーを引いて負圧を発生させます(図1Jおよび図2I)。このステップを3〜5回繰り返します。
5. パラフィンフィルムとプランジャーを取り外し、図2Jのようにアポプラスト抽出された細菌を含む液体を採取します。

結果

図1:シロイナズナ植物を用いた細菌接種およびアポフラスト抽出 。(A) 金属メッシュを適切に取り付けた鉢の準備。(B)(C)に示されたように、つまようじを使って種をまきまくこと。(D)シロイヌズプシスの植物が接種準備完了。(E)...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
20mLシリンジ			特別な要件はありません
50 mL円錐形チューブ	サーステット
パラフィルム	ペシニー・プラスチック包装
ピンセット			特別な要件はありません
直径25cmの真空チャンバー	カーテル	554
真空ポンプ	ガスト	DOA-P504-BN