液体培地での純粋な細菌培養の生成

要約

出典: Brumfield, K. D. ら、 ビ ブリオ・コレラ 菌のバイオタイプの維持および区別に用いられる臨床および環境分離株の実験技術。 J. Vis. Exp. (2017年)

この動画は液体培地中の細菌培養の成長を示しています。振ることで通気が促進され、栄養素が均等に分布し、指数関数的な成長を支え、均一で代謝活性の高い懸濁液が下流の用途に適しています。

プロトコル

1. コレラ菌株の維持と成長

1. 冷凍ストック培養の調製と使用
   1. 1.8 mLの液体ペレットを2分間、無菌の2 mLマイクロ遠心分離管で遠心分離(≥8,600 x g)で2分間培養し、上清液を除去し、ピペッティングで細胞ペレットを新鮮なLuria-Bertani(LB)ブロス900 μLに再懸浮させます。
   2. 培養液に無菌60%(v/v)グリセロール900μLを加え、渦を巻いて混合します。
   3. 混合物を滅菌2 mLの低温チューブに移し、-80°Cで無期限に保存します。
   4. 使用方法は、滅菌接種ループを使って少量の凍結ストックを除去し、LB寒天プレート上で単一コロニーをストリークします。使用後はすぐに-80°Cに戻し、培養物が完全に解凍しないようにしてください。蓋を下にして37°Cで12〜16時間培養します。
2. 液体培地中の一晩培養の成長
   1. 冷凍株からLB寒天プレートへの単一コロニーのストリーク(セクション1.1.4参照)。蓋を下にして37°Cで12〜16時間培養します。
   2. 無菌の10mL培養チューブに液体LBブロス4mLを接種し、無菌のアプリケータースティックで単一コロニーの表面に触れ、そのコロニーを液体ブロスに移します。
   3. シェーカーインキュベーターで225回転毎分(rpm)で37°Cで12〜16時間、曝気しながら培養します。

材料