トリフェニルテトラゾリウム塩化物を用いた ビブリオ・コレラ 菌株比較のための運動性アッセイ

要約

出典: Brumfield, K. D. ほか。ビ ブリオ・コレラ 菌のバイオタイプを維持・区別するための実験技術、臨床的および環境的分離株。 J. Vis. Exp. (2017年)

このビデオでは、トリフェニルテトラゾリウム塩化物を用いた軟性寒天アッセイを実演し、活発に移動する細胞周囲の赤ゾーン形成を通じて代謝活動を可視化することで、 ビブリオ・コレラ 菌株の運動性を評価・比較しています。

プロトコル

1. 運動率アッセイ
   1. ビ ブリオ・コレラ菌 株を液体のLB(ルリア・ベルターニ) ブロスで一晩培養して準備します。
   2. 1.8 mLの一晩培養液を2分間遠心分離(≥8,600 x g)で無菌2 mLのマイクロ遠心分離管にペレットし、ピペットで上清液を除去します。ピペットで細胞ペレットを1.8 mL 1x PBS(リン酸塩緩衝生理食塩水)に再懸浮させます。
   3. 洗浄手順を3回繰り返し、最終1.8mL 1x PBSでの再懸濁液を行います。
   4. 洗浄液培養に接種用の針を挿入し、培地に縦方向に刺して運動性寒天プレートを接種します。各接種の合間には、ブンゼンバーナーでワイヤースタブを滅菌し、刺す際は接種スタブが曲がらないように注意してください。これは結果に影響を与える可能性があります。
   5. 蓋を上にして37°Cで14〜24時間培養皿を培養します。14時間後は培養物の過剰増殖を防ぐために運動板を注意深く監視してください。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
寒天	ベクト、ディキンソン社	214030	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=214030&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D214030%26typeOfSearch%3DproductSearch
ベンチトップ遠心分離機	エッペンドルフ	5424	1.5mlのエッペンドルフ管用の遠心分離機は何でもいいです
ル・スタブ	デコン・ラボ社	MP186-5	http://deconlabs.com/products/lestab/
LBブロス(ミラー)	サーモ/ギブコ	10855021	静的細菌培養およびOD測定のために
ペトリ皿(150 mm x 15 mm)	フィッシャー・サイエンティフィック	FB0875714	https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875714?searchHijack=true&searchTerm=FB0875714&searchType=RAPID
PBS 1x			静的細菌培養およびOD測定のために
トリフェニルテトラゾリウム塩化物	アルファ・アーサール	A10870	https://www.alfa.com/en/catalog/A10870/