マイクロプレートリーダーを用いた細菌増殖の正確かつ高スループット解析

Abstract

出典: 黒川M. ほか。細菌増殖の高精度かつ高スループットの解析。 J. Vis. Exp. (2017年)

このビデオはマイクロプレートリーダーを用いた細菌増殖の高スループット定量化を示しています。培養準備、光学密度測定、成長動態の解析に関わる手順を概説しています。

Protocol

1. 成長のリアルタイム記録
   1. 接種された培養サンプルの位置を示すために、96ウェルプレートのピクトグラム(8×12の表)を描いてください。表を印刷して実験の参考にしてください。
      手記： マイクロプレートの縁にあるウェルは蒸発のため、ブランク培地のみを含ませるべきです。
   2. 滅菌済みの96ウェル平底マイクロプレート(蓋付き)、P-1000、1000μLピペットチップ、P-200、200μLピペットチップ、複数の1.5mLマイクロチューブ、8マルチチャネルピペット、滅菌試薬リザーバー、室温M63、そして大 腸菌 グリセロールストックをクリーンベンチに置きます。
   3. 試薬リザーバーに約25 mLのM63を加えます。この貯留槽在庫は以下のすべての工程に使用してください。
   4. シリアル希釈の準備としてマイクロチューブに900μL M63を加えます。
   5. グリセロールストックは室温で解凍します。解凍したグリセロールストックに900μL M63を加え、渦巻きます。これにより、元のグリセロールストックが10倍に希釈されます。
   6. 10倍希釈のうち100μLを、900μLのM63と渦を含む別のマイクロチューブに移します。これにより100倍の希釈が起こります。
   7. 希望の希釈数に達するまでステップ1.6を繰り返します。
   8. 8チャンネルピペット(P-200)を使ってマイクロプレートの端部に200μL M63を充填します。
      手記： これらのウェルはブランクとして利用可能です。
   9. 参照表(ステップ1.1)に従い、ステップ1.4から1.7で準備した希釈済みサンプル200μLをマイクロプレートウェルに投入します。希釈されたサンプルを充填前にボルテックスし、同じサンプルをプレート上の異なる位置の複数の井戸に積み込みます。
   10. 96ウェルのマイクロプレートをプレートリーダーに置きます。
   11. 「タスクマネージャー」で「Read Now」を開き、プログラムを選択してください。「OK」をクリックして測定を開始します。録音を新しい実験ファイルとして保存し、データ解析用にしてください。

Materials