マイクロプレートリーダーを用いた細菌増殖の正確かつ高スループット解析

要約

出典: 黒川M. ほか。細菌増殖の高精度かつ高スループットの解析。 J. Vis. Exp. (2017年)

このビデオはマイクロプレートリーダーを用いた細菌増殖の高スループット定量化を示しています。培養準備、光学密度測定、成長動態の解析に関わる手順を概説しています。

プロトコル

1. 成長のリアルタイム記録
   1. 接種された培養サンプルの位置を示すために、96ウェルプレートのピクトグラム(8×12の表)を描いてください。表を印刷して実験の参考にしてください。
      手記： マイクロプレートの縁にあるウェルは蒸発のため、ブランク培地のみを含ませるべきです。
   2. 滅菌済みの96ウェル平底マイクロプレート(蓋付き)、P-1000、1000μLピペットチップ、P-200、200μLピペットチップ、複数の1.5mLマイクロチューブ、8マルチチャネルピペット、滅菌試薬リザーバー、室温M63、そして大 腸菌 グリセロールストックをクリーンベンチに置きます。
   3. 試薬リザーバーに約25 mLのM63を加えます。この貯留槽在庫は以下のすべての工程に使用してください。
   4. シリアル希釈の準備としてマイクロチューブに900μL M63を加えます。
   5. グリセロールストックは室温で解凍します。解凍したグリセロールストックに900μL M63を加え、渦巻きます。これにより、元のグリセロールストックが10倍に希釈されます。
   6. 10倍希釈のうち100μLを、900μLのM63と渦を含む別のマイクロチューブに移します。これにより100倍の希釈が起こります。
   7. 希望の希釈数に達するまでステップ1.6を繰り返します。
   8. 8チャンネルピペット(P-200)を使ってマイクロプレートの端部に200μL M63を充填します。
      手記： これらのウェルはブランクとして利用可能です。
   9. 参照表(ステップ1.1)に従い、ステップ1.4から1.7で準備した希釈済みサンプル200μLをマイクロプレートウェルに投入します。希釈されたサンプルを充填前にボルテックスし、同じサンプルをプレート上の異なる位置の複数の井戸に積み込みます。
   10. 96ウェルのマイクロプレートをプレートリーダーに置きます。
   11. 「タスクマネージャー」で「Read Now」を開き、プログラムを選択してください。「OK」をクリックして測定を開始します。録音を新しい実験ファイルとして保存し、データ解析用にしてください。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
リン酸二カリウム	和子	164-04295
リン酸一カリウム	和子	166-04255
硫安	和子	019-03435
硫酸マグネシウム・ヘプタハイドレート	和子	138-00415
チアミン-HCl	和子	201-00852
グルコース	和子	049-31165
塩酸塩	和子	080-01066
硫酸鉄(II)七水和物	和子	094-01082
島	和子	168-21815
グリセロール	和子	075-00611
ピペットチップ、200 μL	ワトソン	110-705Y
ピペットチップ、1,000 μL	ワトソン	110-8040
マイクロチューブ(1.5 mL)	ワトソン	131-715C
8チャンネルピペット	ワトソン	NT-8200
パソリナ攪拌器	一つに	2-4990-02
ガラスシリンダー(200 mL)	一つに	1-8562-07
精密pHメーター	一つに	AS800 / 1-054-01
ピペットマン P-200	ギルソン	1-6855-05
ピペットマン P-1000	ギルソン	1-6855-06
マイクロチューブスタンド	BMの略歴	801-02Y
渦動	BMの略歴	BM-V1
Corning Costar 96ウェルマイクロプレート(蓋付き、フラットボトム、クリア)	シグマ・オルドリッチ	コーニング、3370年
コーニング・コスター試薬リザーバー(50 mL)	シグマ・オルドリッチ	コーニング、4870年
EPOCH2	バイオテック	2014-EP2-002 / EPOCH2T
バイオクリーンベンチ	パナソニック	MCV-B131F
細菌株	ストレインバンク組織;日本の国立生物資源プロジェクト(NBRP)