タイムラプス顕微鏡を用いた細菌の生物学的ノイズの連続モニタリング

要約

出典: Chaimovitz, E. A., 他 タイムラプス顕微鏡を用いた大 腸菌 の生物学的ノイズの連続測定。 J. Vis. Exp.(2021年)

このビデオは、タイムラプス顕微鏡を用いて細菌の成長と分裂中のGFP蛍光の変動を追跡することで、 大腸菌 の生物学的ノイズをリアルタイムで可視化するものです。

プロトコル

1. 顕微鏡撮影のための試料準備
   1. フラスコを水浴から取り出してください。フラスコの外側を拭き取り、室温(25°C)まで冷ます。
      手記： タイマー終了の約3分前にフラスコを取り出します。
   2. ゲル3mLをプレートの周囲に円を描くように注ぎます。数分間固まらせます。
   3. プレートをテープで封じ、25Gの針でいくつかの穴を開けます。水の結露がジェルに滴り落ちないように、すべての皿をひっくり返してください。
   4. すべての皿を4°Cで30分間孵卵し、細胞分裂を防ぎつつ完全な固化を促します。
      手記： 連続測定のために4°Cの温度で、1日以内に保管してください。
   5. メーカーの指示に従って顕微鏡を起動してください。
   6. 最も低い増幅レンズで初期の焦点を見つけ、自動フォーカスシステム(AFS)を作動させます。
   7. 必要に応じてオイルを使い、レンズをオイルで浸し、プラットフォームコントローラーでプレートを動かして慎重に塗り広げてください(手動ではなく)、AFSを再び作動できます。
   8. Z方向の相対断面を用い、Zステップ断面のデフォルトの提案に従います。
      手記： 明視野画像は5分ごとに、蛍光画像は20分ごとに撮影してください。時には最初の30分でフォーカスを調整しなければならないこともあります。顕微鏡インキュベーターボックスと油を予熱し、サンプルを冷蔵することで、最初の焦点の喪失を減らすのに役立ちます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
35mmガラスアンテナ	マテック	P35G-0.170-14-C	厚さは顕微鏡レンズに対応しています。
アガロース	ロンザ	5004	LB準備
エクリプスTi	ニコン		逆立顕微鏡
イマーソル518F	ツァイス	4449600000000	浸漬油
パラフィルムテープ	ベミス	PM-996	本文中ではテープと呼ばれています