共培養における微生物間相互作用を研究するためのin vitroアッセイ

要約

出典: Temkin, M. I. ほか微生物間相互作用の調査のための高スループット共培養アッセイ。 J. Vis. Exp.(2019年)

このビデオは、共培養中のコリネバクテリウム・プロピンクムとブドウ球菌の微生物相互作用を研究するためのin vitroアッセイを示しています。

プロトコル

1. 標的生物接種

注: 一晩の孵化後、培養物が濁っていることを確認してください。一部の細菌培養は培養管の底部で凝集することがあります。培養管をボルテックスして塊を分散させ、培養濁度を評価します。

1. ターゲットプレートは、空の12ウェルプレートの各ウェルに1.8mLの脳心注入(BHI)ブロスと200μLのターゲット一晩培養液を充填して準備します。
   注: 標的生物とは、共培養相互作用アッセイを用いて阻害状態が決定される生物のことを指します。この実験の対象菌は、人間の鼻洗浄サンプルから分離された ブドウ球菌 属です。
2. 包装を開けて、無菌接種スタンプをターゲットプレートに貼ります。ウェル内で培菌を優しく回し、隣接するウェル同士が混雑しないように注意してください。
3. 接種スタンプを持ち上げ、各スタンプ先端に希釈された標的培養液の滴があることを確認してください。
4. 接種スタンプを未接種のバイオアッセイプレートに置き、スタンプを優しく揺らして各ウェルに接種を送り込むことで、単一培養コントロールプレートを準備します。接種スタンプが除去されると、バイオアッセイプレートのウェルに培養液滴が見えるはずです。
   1. もし培地の濃度が不均一で接種スタンプが施されていない井戸がある場合は、ピペットを使って右側に希釈した3μLの一晩培養液を塗布します。
5. 上記の方法でバイオアッセイプレートに接種を行います(ステップ1.4.1参照)、ただしスタンプの先端が12ウェルプレートの右側に合うように合わせてください。接種時には、スタンプが既存の細菌コロニーに接触しないようにしてください。
6. スタンプを慎重に取り外し、ターゲットプレートに戻してください。
7. すべてのプレートが接種されるまで、各バイオアッセイプレートに対して接種を繰り返します。
8. 適切な温度で逆さまにして7日間培養します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
12ウェル培養プレート、蓋付き無菌	グライナー・バイオ・ワン	665 180
寒天、細菌学	VWR	J637
ブレインハート注入ブロス	ドット・サイエンティフィック	DSB11000-5000