トマト苗の根系菌による病原性細菌の定着を評価するための生存細胞数

Abstract

出典: Matthysse, A. G. 実験室で測定された植物表面への細菌の付着。 J. Vis. Exp.(2018年)

このビデオでは、野生型およびセルロース欠乏病原菌によるトマト苗の根の定着を測定するプロトコルを示します。密接着細菌の有効なカウントでは、野生型株によるより強い接着力と微小コロニー形成が示されており、セルロースが安定した根の定着に果たす役割が浮き彫りになります。

Protocol

1. 活発細胞数を用いた接着の測定

1. 砂で育てられた植物に結合する生存細菌の数を決定してください
   1. 植物を容器から取り出し、サンディングします。植物を容器から取り出すには、まず容器の上下の密封材を取り除きます。容器を滅菌紙の上に置き、砂や土全体を優しく取り除き、容器を表面に軽く叩いて素材を緩めて大きなテーパー状の円筒形に植えます。

1. 必要に応じて、ヘラや棒を使って容器の底から入る部分の材料を緩めます。

2. 砂や植物を含む土の円筒が紙の上に自由になったら、真ん中で割って植物の根を露出させます。必要に応じて、容器の縁や根元付近から砂のサンプルを採取してください。これは細菌の拡散(および蓄積・増殖)を判断するのに役立つ場合があります。
3. 根の長さを測ってください。根を持ち上げ、根にゆるく付着している砂や細菌(根圏の素材)を、一定量の水やバッファーに浸して優しく振って取り除きます。適切な培地(例えばルリア寒天)にプレートすることで、得られた懸濁液中の細菌の生存細胞数を決定します。これは根にゆるく結びついている細菌の数を表しています。
4. 超音波検査で密に結合した細菌を除去し、その数を決定します。

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
種子	どんな人でも	該当なし	種子ロット番号と品種をメモしてください
砂	海砂 フィッシャー・サイエンティフィック	S25
砂	シグマ・オルドリッチ	S9887
コーネタイナー	スチューウェ&サンズ社	レイ・リーチ・コーン・テイナー	育てたい植物の種類に合わせて、さまざまなサイズのものが用意されています
バスソニケーター	どの科学用品会社でも	該当なし
パラフィルム	どの科学用品会社でも	該当なし