キイロショウジョウバエの精巣は、迅速にかつ効率的に解剖針を用いて、成人男性から分離することができます。練習すれば、人は容易に1つまたは2つの間に抗体または酵素ベースのアッセイのためのハイスループットシーケンシング以上の伝統的な分子生物学的手法により、または蛋白質のDNAやRNAの解析に十分な精巣の量を分離することができます。
この記事について
サマリー
要約
キイロショウジョウバエの精巣は、幹細胞の維持と分化、減数分裂、そして相馬生殖細胞の相互作用の研究にとって重要なモデルを提供しています。精巣は、通常、0から3日間蛹のケースから羽化した後の成人男性から分離されています。野生型ハエの精巣は、容易にそれらが黄色なので、他の組織と区別が、 白色変異ハエの精巣は、室内実験のための共通の遺伝的背景には、ハエの腸への形状と色の両方で類似しているされています。黒い背景にガラスの顕微鏡スライド上に郭清を行うことはかなり容易に睾丸を識別することができます。精巣は、解剖針を用いてハエから削除されます。精巣の解剖用ピンセットを使用するプロトコルと比較して、私たちの手法は盛んに実行されている個人は400から600精巣をもたらし、時間あたり200から300の野生型のハエから精巣を解剖できるように、はるかに高速です。 白ハエからまたは精巣のサイズを小さくする変異体からの精巣は、細かく分析し、通常1時間あたり200〜400精巣を得ることが困難です。
プロトコル
- 黒の背景にガラスの顕微鏡スライドを作る：顕微鏡のスライドと同じサイズに20＃のホワイトペーパーをカット。永久的なマーカー（例えば、シャーピー）を使用してスライドサイズの用紙の黒の色片側。黒側に白い接着剤（エルマーの）を適用し、スライドに紙を接着する。スライドを再利用することができます。 ¾"ラベルのテープを（Fisherbrand）を使用して、所定の位置に固定するCO 2フライパッドに、顕微鏡のスライド、ガラス面を固定します。
- 0〜3日齢の雄のハエを集める。
- 氷のバケツを準備し、生理食塩水（PBS）、解剖針をリン酸緩衝。
- CO 2のストリームを使用して50から100ハエをAnaesthetizeと顕微鏡スライドの近くにフライパッドにボトルやバイアルからそれらを転送する。
- 顕微鏡のスライドの中央にあるドロップでピペット〜50μlの氷冷PBS。
- 穏やかにPBS、PBSのドロップにそれを配置する - 針とハエの優しいタッチ腹側（すなわち、翼の近く）に解剖針を解剖浸漬針とオスのハエを拾う。
- しっかりと押し下げ、胸部と腹部の間に、その場の真ん中に1つの針を置きます。六番目（A6）と第七（A7）腹部のセグメント（下から2番目と3番目のストライプ）の間に他の針を置き、離れて胸部から腹部を引き出します。
- 特に他の臓器、腸から離れて睾丸をいじめる。特に白色変異体、精巣、腸のようになります。主な相違点は、常に対になって精巣ことであり、それぞれの精巣は、スパイラルパターンを有し、腸よりも色のより白いです。
- ポリプロピレン製微量遠心チューブに氷冷したPBSで睾丸を保管してください。
代表的な結果：
図1。 flybase.org/reports/FBim0000074.htmlから男性生殖器系の背側、。 Flybase帰属："ミラー（1950）からページ508の図38の後A.ミラーキイロショウジョウバエの成虫の内部解剖学と組織学M. Demerec、エディタ、ショウジョウバエの生物学、第6章、ページ420に - 。。。 534。コールドスプリングハーバーラボラトリープレス、復刻版、1994。コールドスプリングハーバーラボラトリープレス、1994年著作権。コールドスプリングハーバーラボラトリー（CSHL）を押してから、親切な許可を得て使用しています参照http://www.cshlpress.comを 。"
ディスカッション
我々は、成人男性のキイロショウジョウバエの精巣を分離するためのプロトコルを提供しています。技術は自分の両手を調整が必要なので、スキルは練習が付属しています。
開示事項
利害の衝突は宣言されません。
謝辞
著者は、我々の研究室にこの手法を導入するためのバシアVaginに感謝。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント | |
|---|---|---|---|---|
| 解剖用針 | 器具 | Fisher Scientific | S17346 | |
| マイクロプレパレートスライド（プレーン） | 器具 | Fisher Scientific | 12-553 | |
| 顕微鏡用ライト | 器具 | Schott AG | KO-1500 | |
| CO2 パッド | 器具 | Genesee Scientific | 59-172 | |
| ベンチトップ型 Flowbuddy コンプリートシステム | 器具 | Genesee Scientific | 59-122WCU | |
| バブル式加湿器 | 器具 | Salter Labs | 7100 | |
| ボールフィラー針 | 器具 | Genesee Scientific | 54-119 | |
| ¾” ラベルテープ | 消耗品 | Fisher Scientific | 15-901-5B |
参考文献
- Singh, S. R., Hou, S. X. Immunohistological Techniques for Studying the Drosophila Male Germline Stem Cell. Methods Mol Biol. 450, 45-59 (2008).
再版と許可
