下大静脈血栓症のマウス完全なうっ滞モデルは、静脈壁の組織と血栓の定量化可能な量が得られます。それは静脈壁と閉塞性血栓の間に、急性から慢性の炎症への進行を評価する上での相互作用を評価するために役立っています。
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この記事について
サマリー
要約
静脈血栓塞栓症（VTE）は、深部静脈血栓症（DVT）と肺塞栓症（PE）の両方が含まれています。米国（US）、高い罹患率と死亡率に率は深刻な健康上の懸念1-2 VTE行う。心臓病と脳卒中の後に、VTEは番目の最も一般的な血管疾患の3です。単独で米国では、毎年影響を推定90万人は30万の死亡は毎年3を発生すると、そこにあります。この病気のメカニズムを研究するためのin vivo動物モデルでの信頼性が必要です。
下大静脈血栓症のマウス完全なうっ滞モデルを使用する利点はいくつかある。マウスモデルでは、劇的にコストを削減し、限られた可用性のテストエージェントの非常に小さなボリュームの管理が可能になります。最も有望な特定の炎症と凝固因子の機能が線引きされるように遺伝子ノックアウトによるマウスの可能性があります。現在の分子アッセイは、静脈の壁、血栓、全血、及びアッセイのためのプラズマの定量を可能にする。しかし、このモデルを含む主要な関心事は、手術のサイズの制約と血管のもろさです。また、小さなIVCのサンプル重量（0.005グラムを意味する）に起因するそれは、このようなリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（RT - PCR）、ウェスタンブロットなどの動物の組織のための正確な統計分析のための番号、血栓、および血アッセイを大きくする必要がある酵素結合免疫吸着法（ELISA）、ザイモグラフィー、静脈壁および血栓細胞の解析、および全血と血漿アッセイ4-8。
うっ滞モデルの大きな欠点は、血流の不足が血栓と静脈の壁に投与する全身治療薬の最大効果を阻害することです。
プロトコル
1。マウスの麻酔の手順
- 動物は、毎分0.5リットル（気化器制御）の流量で、自分のケージから取り出し、5％イソフルランおよび100％酸素でガスの誘導のための麻酔術前誘導のチャンバー内に配置されます。
- マウスは、麻酔の誘導チャンバ内鎮静チャンバーから除去し、髪の毛の脱毛は、（1分）使用されている場合、腹側腹部を電気バリカンで剃毛、またはチャンバー内に保持されています。
- まだ鎮静下で、彼らの重量を測定している間、目がイソフルランと酸素を使用して、ノーズコーンと、滅菌眼軟膏が塗布してから、全身麻酔下での加熱装置を循環する暖かい水で背recumbancyに配置されます。この時点で、酸素の割合は、毎分0.2リットルに削減されます。
- 腹部はクロルヘキシジン液（クロルヘキシジン二酢酸は急速にbacterialcidalと持続性がある）を噴霧し、滅菌ガーゼで拭いて三回か手術部位はきれいになるまでさ。
2。マウスマイクロ外科および回復手順
- 腹側正中切開（2cmは）腹部を露出皮膚や腹壁を通して虹彩をハサミで作られています。滅菌生理食塩水に浸した2x2inのガーゼは、動物の左側に腸を反映するために使用されます。マウスの制止する人は、下大静脈（IVC）の可視化を可能にする場所に置かれている。
- この時点で、0.2リットル/分の2％isofluranceと100％の酸素率のメンテナンスレベルは、外科的処置の残りのために使用されます。
- 鈍的切開は、滅菌アプリケーター綿棒や余分な繊細な虹彩の半分の湾曲した組織鉗子を用いて促進される。ケアは、彼らは非常に壊れやすいために、マウス組織の取り扱いには注意が必要です。腹腔内に入ると、このようにIVCの可視化を可能にする、滅菌ドレープの上に腸を反映して体外に出すために無菌の生理食塩水に浸した4x4inのガーゼを使用してください。
- 側枝が7から0、非反応性prolene縫合糸で連結している間に腎静脈から腸骨分岐へのすべてのIVCバック枝は、、焼灼されています。
- IVCは、腎静脈にだけ劣っ、大動脈から分離されている。 7から0 proleneはIVCを連結するために使用されます。
- 開腹部位は、2層方式で閉じられます。当研究室では、腹壁を閉じるには、連続的なパターンで5〜0 vicryl、合成縫合糸を、使用しています。接着剤の皮膚接着剤は、皮膚を閉じるために使用されます。除去するための外付縫合糸はありません。
- マウスはその後、個々のマウスのケージ中に回収され、加熱ランプ（最小距離 - 24インチ離れてケージから）下（2時間まで45分）手術後に観察された、その後、元の住宅に戻った。それは研究目的に干渉していない場合の鎮痛薬と抗炎症剤を用いることができる。科学的な鎮痛剤を差し控えることを正当化、獣医、そしてICUCAの承認が必要とされています。当研究室では、ブプレノルフィン、0.05〜0.1 mg / kgのSQは、マウスのための優秀なプリと術後の鎮痛剤であることを見出した。全身鎮痛薬は、実験結果を混乱させる可能性がある場合に加えて、4mg/kgでのリドカインは、（0.4 mlの1％溶液の/ kg）の切開部位に注入することができます。
- IVCあるいは排水枝を結紮または焼灼されていない場合を除き、各実験群から偽の動物は、外科的アプローチのために使用される上記の解剖を受ける。
- 安楽死は、げっ歯類のための安楽死についてアメリカ獣医学協会のガイドラインで定められている勧告に従って行われます。
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ディスカッション
下大静脈血栓症のマウス完全な停滞のモデルは、さまざまな年齢のマウスの複数の株に行うことができます。モデルは、最も重量の少なくとも20グラムのマウスに適しています。静脈血栓症のこの動物モデルは、研究者が静脈の壁と閉塞性静脈血栓の間に炎症性の相互作用を研究することができます。我々の経験から、我々は各群10匹以上の動物が血栓重み、静脈壁の炎症細胞数、静脈壁タンパク質、静脈壁の遺伝子発現、および活動のための全血または血漿分析のためにグループ間で統計的有意性を得るために必要とされることを発見したアッセイ。
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開示事項
利害の衝突は宣言されません。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 消耗品と備品 | |||
| イソフルランガス | |||
| Prolene 7から0縫合 | |||
| Vicryl 5から0縫合 | |||
| 皮膚接着剤 | |||
| 眼潤滑 | |||
| Nolvasanソリューションまたは静菌ソリューション | |||
| 実体顕微鏡スコープ | |||
| MediCapture | |||
| コットンアプリケーター | |||
| 2 × 2ガーゼ | |||
| 暖房パッド | |||
| 麻酔器 | |||
| ガラスビーズ器具消毒器 | |||
| マイクロ手術器具 | |||
| 腹部Restrainers |
参考文献
- Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study. J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).
- White, R. H., Keenan, C. R. Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism. Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).
- Heit, J. A. The epidemiology of venous thromboembolism in the community. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).
- Henke, P. K., Varga, A., De, S. Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).
- McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis. Thromb Res. 125, 72-78 (2010).
- Myers, D., Farris, D., Hawley, A. Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis. J Surg Res. 108, 212-221 (2002).
- Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis. J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).
- Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin. J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).
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