このメソッドは、マウスから乳腺の発達と機能を細かく分析し、評価する方法について説明します。射乳がオキシトシンベースの筋上皮細胞の収縮アッセイを用いて評価される間に切除された乳腺を全部マウントを使用して開発の度合いを評価されています。
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この記事について
サマリー
要約
人間の乳腺には、15〜20葉で構成されて乳首における分岐ダクトシステムの開口部に分泌するミルクその。これらのローブは分泌肺胞と収束ダクト1から作られたターミナルダクト小葉単位の数で構成そのものです。マウスでは、同様のアーキテクチャは、ダクトと肺胞が結合組織の間質内に散在されている妊娠で観察される。マウス乳腺上皮は細胞の2つの層、基底膜2の範囲で示される筋上皮細胞の外側の層に囲まれた管腔細胞の内側の層から構成されるダクトのシステムのようなツリーです。出生時に、唯一のrudimental膵管ツリーには、主ダクト15〜20支店で構成される、存在しています。ホルモン3,4,5の影響を受けて、約4週齢の思春期の開始時に枝の伸長と増幅の開始、、。 10週間で、間質のほとんどは、妊娠2日まで各性周期に分岐し、回帰のサイクルを受けることになるダクトの複雑なシステムに侵略されている。妊娠の開始時に、開発の第2段階は、肺胞6,7と呼ばれるブドウの形をしたミルクの分泌構造を形成する上皮の増殖と分化と、始まります。分娩に続いて、泌乳期間全体を通して、牛乳は内腔の分泌細胞で産生され、肺胞の内腔内に格納されています。仔の授乳によって誘発される神経反射によって刺激されたオキシトシン放出は、、牛乳はそれが子犬8〜使用可能になった乳首にダクトを介して輸送されるので、肺胞の周りやダクトに沿って筋上皮細胞の同期した収縮を誘発する。乳腺の発達、分化および機能はしっかりと画策し、必要とする、間質および上皮間だけでなく、上皮9,10,11内筋上皮および管腔細胞間の相互作用だけでなく、されています。これにより、これらの相互作用に関与する多くの遺伝子の変異は、妊娠初期、妊娠後期に分化し、授乳12,13につながる分泌活性化の間に思春期や肺胞形成時にどちら管伸長が損なわれる可能性があります。この記事では、我々はマウス乳腺を細かく分析し、全体のマウントを使用して開発を評価する方法について説明します。我々はまた、生体外オキシトシンベースの機能アッセイを用いて筋上皮の収縮と射乳を評価する方法を示します。乳腺の発達と機能に関する遺伝子変異の効果は、このように変異体と野生型コントロールマウスではこれら2つの手法を実行することにより、 その場で決定することができる。
プロトコル
1。乳腺の解剖
- CO 2吸入を使用して、マウスを安楽死させる。それは解剖がより困難にレンダリングする、乳腺の周りの血液の蓄積の首と、結果に大きな血管に損傷を与える可能性があるので、可能であれば、頸椎脱臼を避けてください。しかし、他の基準がそのようなオキシトシンの血中濃度として、同じマウスで評価される場合は、代替の安楽死の方法は、これはあなたのIACUCによって評価しなければならないのに、必要な場合があります。
- ホイルに包んで、発泡スチロールに、その背中の上でマウスを配置し、四肢に広がる。しっかりと16から20ゲージの針（図1A）を使用して、すべての四肢を固定する。
- 70％エタノールで寛大にマウスをスプレーしてください。
- 鉗子を使用して、正中線で腹部の皮膚を引き上げ、鋭いはさみと小さな切開を行います。
- 腹部や胸部の空洞（図1B）をパンクチャ回避しながら切開から始めて、動物の首に皮膚をカット。
- "Yの形"（図1B）、その結果、正中切開に前足で皮膚を切り取ります。リア手足の皮膚と同じ方法（図1B）をカット。
- 静かにマウスの側面に腹部と胸部の皮膚剥離、止血鉗子を使用する。必要に応じて、穏やかに論理積組織をカット。
- 皮膚の下側に接続されている乳腺を公開し、16〜20ゲージの針を使用して、発泡スチロールにスキンを修正。進むと時間（図1C）で片側を完了します。 <....
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ディスカッション
乳腺の発達と機能は密接にオーケストレーションされています。変異マウスは、腺のアーキテクチャ13,12を評価する必要性を強調する乳腺の発達と機能を損なうことができる遺伝子の変異を抱くことができる。乳腺の発達のすべての段階でこの資料に記載したように全体を取付けを行うことができます。典型的には、上皮の開発は思春期（〜6週齢）の途中でと2,10思春期（〜10〜12週齢）の後に、思春期（〜4週齢）の開始時に評価される。これらの段階で、ダクト分岐、末端のつぼみとダクトの長さの数の量は、腺の発達14,15の程度を定量化するために決定することができます。同様に、alveologenesis（妊娠中の肺胞の開発）は、通常、妊娠中に2〜3点で決定され、授乳と退縮時に発生する構造的な変化は、全体のマウント腺の準備16で観察し、定量することができる。しかし、妊娠後期や授乳中のマウスからの全マウントの定量化は、組織の密度のために困難になる可能性があります。それは特にそれらのステージ12に対して、組織学的分析と全体のマウントを組み合わせることをお勧めします.......
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開示事項
利害の衝突は宣言されません。
謝辞
これらの研究は、DWLにCIHRとCBCRA補助金によって賄われた。 IPは、CIHR - STP、FRSQとCIHRから奨学金によって賄われていた。 MKGSはOGSとCIHR - STPの奨学金によって賄われていた。著者らは、マウスの繁殖との彼の援助のためにケビンバーに感謝。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 試薬 | 会社 | カタログ番号 | |
| カーマイン | シグマアルドリッチ | C1022 | |
| アルミニウムカリウムの硫酸 | シグマアルドリッチ | A6435 | |
| チモール | シグマアルドリッチ | T0501 | |
| メチルサリチル酸 | シグマアルドリッチ | M6752 | |
| オキシトシン | シグマアルドリッチ | O3251 |
参考文献
- Geddes, D. T. Inside the lactating breast: the latest anatomy research. J Midwifery Womens Health. 52, 556-556 (2007).
- Sternlicht, M. D. Key stages in mammary gland development: the cues that regulate ductal branching morphogenesis. Brea....
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再版と許可
