マウスモデルにおけるCalvarial Window生成:マウス頭蓋骨の上部に窓を作るための外科的処置

要約

出典:Geisler, J. A. et al.頭蓋内注射と磁気共鳴画像法による脳転移のモデリング。J. Vis. Exp.(2020年)

このビデオでは、マウスモデルの脳にアクセスするための頭蓋窓を作成する外科的処置について説明します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 手術用の定位ユニットを準備する

1. すべての麻酔器、デジタルバーニアスケール、デジタルインジェクターの電源を入れます.
   手記：すべての手術器具は、手術前に適切に洗浄および滅菌する必要があります。
2. 生物学的安全キャビネットに誘導チャンバーアタッチメントを備えた麻酔器を利用します(図1A)。
3. 麻酔器のすべてのチューブが定位フレーム(図1B、挿入図1C)に接続されており、チューブのクランプが使用されているすべてのユニットに対して開いていることを確認します。手術に使用されない定位フレームにつながるチューブのクランプをすべて閉じます。
4. マウスの体重に基づいて、麻酔器をメーカーが推奨するノーズコーン流量に設定します(例:25 gの動物の体重:ノーズコーンの流量34 mL / min).
   手記：この定位セットアップに含まれるヘッドホルダーは、成体マウスにのみ推奨されます。定位設定に含まれるメーカーの推奨事項に従っていることを確認します。
5. シリンジにあら....

結果

図1:定位および麻酔システム(A)生物学的安全キャビネット内の麻酔導入チャンバーのセットアップ。(B)麻酔器から定位装置上のノーズコーンまでの麻酔チューブを強調した定位麻酔薬送達セットアップ((C)の挿入図を参照)。緑の矢印は供給された麻酔ガスチューブを示し、青い矢印は清掃されたガスチューブを示します。(C)ドリルアタッチメント付き定位スタンド。挿入図は、麻酔チューブ(緑と青の矢印)、マウスバー、およびイヤーバーを示しています。(D)自動シリンジポンプとマウス昇降ボックスを備えた定位スタンド。このボックスは、マウスを適切な高さまで持ち上げ、体温を維持するために使用されるハンドウォーマーが入った逆ピペットチップボックスです。挿入図は、自動注入装置内のハミルトンシリンジの向きを示しています。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
手術材料
ベタジン	パデュー製品	19-027132	ポビドンヨード、7.5%
ボーンワックス	外科専門分野	903	無菌で可鍛性のある蜜蝋とパルミチン酸イソプロピル
ブポノルフィンSR-ラボ	ズーファーム	該当なし	長時間作用型注射用鎮痛剤 5 mL (0.5 mg/mL) ポリメトリック製剤
コットンチップアプリケーター	ピューリタン	25-806 10WC	滅菌された長い茎の綿の先端アプリケーター
目の軟膏	プラルーベ	17033-211-38	潤滑性ワセリンおよび鉱物油ベースの眼科用軟膏
ハンドウォーマー	ホットハンド	HH2	空気活性化ヒートパック
イブプロフェン	アップ&アップ	094-01-0245	液体懸濁液中5mLあたり100mg
イソフルラン	ヘンリー・シャイン社	1182097	麻酔気化器で使用する液体麻酔薬
メス	インテグラミルテックス	4から410	#10使い捨てメスの刃
縫合	コヴィディエン	SP5686G	45 cmスウェッジ5-0モノフィラメントポリプロピレン縫合糸
脳定位固定装置ユニット
高速ドリル(フォアダム)	コップフ	モデル1474	最大38,000 RPM
マウスガス麻酔ヘッドホルダー	コップフ	モデル 923-B	歯の穴とノーズコーンを備えたマウスバー
破裂しないイヤーバー	コップフ	モデル922	マウスアプリケーションに適したイヤーバー
脳定位固定装置(Stereotaxic Instrument)	コップフ	モデル940	ベースプレート、フレーム、リニアスケールアセンブリ、デジタル読み出しモニター付き
麻酔器
SomnoSuite低流量デジタル気化器	ケントサイエンティフィック	SS-01	デジタル麻酔器
SomnoSuiteマウス用スターターキット	ケントサイエンティフィック	ソムノ・メシェキット	インダクションチャンバー、麻酔シリンジ2個、18インチチューブ、プラスチック製ノーズコーン、廃アネシェシアガスボンベ2個付属