スナップ凍結によるマウス脳の凍結保存:組織学的解析のためのマウス脳全試料の急速凍結技術

要約

出典:Comba, A. et al. Laser Capture Microdissection of Glioma Subregions for Spatial and Molecular Characterization of Intratumoral Heterogeneity, Oncostreams, and Invasion. J. Vis. Exp. (2020)

このビデオは、マウスの脳を凍結保存して、腫瘍組織から個別の解剖学的領域または特定の細胞集団を分離する方法を示しています。この手法は、その後の解析のために脳組織形態の最適な光学分解能を得る上で重要です。

プロトコル

1. 神経膠腫腫瘍を有する脳の凍結保存

1. 脳を凍結保存する前に、冷たいイソペンタン/2-メチルブタンを充填した瓶を準備し、液体窒素で満たされた容器に入れます。溶剤を冷まします。
2. 30%ショ糖溶液から脳を取り出し、濾紙で拭き取って乾かします。
3. 凍結型に油性マーカーでラベルを付けます。気泡を避けて、クライオモールドの中心に約5mLのOCT(最適切断温度化合物)を慎重に加えます。
4. OCTを所望の向きで含んだクライオモールドに脳を入れます。脳が完全に沈むまで、型にOCTを充填します。清潔な鉗子を使用して、OCTと脳を低温のイソペンタン/2-メチルブタンに素早く入れます。
5. OCTが固まったら(~30〜40秒)、脳と一緒にクライオモールドを取り出し、ドライアイスに入れます。2-メチルブタンに脳を入れた型は、固体OCTに亀裂が生じる可能性があるため、2分以上放置しないでください。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
使い捨て埋め込み型を剥がす	電子顕微鏡科学	70182
研究用クライオスタット	ライカ	CM3050の
ティッシュプラスOCTコンパウンド	フィッシャーサイエンティフィック	23-730-571