凍結マウス脳組織切片作製:凍結マウス脳組織から薄い凍結組織切片を得るための手順

要約

出典:Comba, A. et al. 腫瘍内の不均一性、オンコストリーム、および浸潤の空間的および分子的特性評価のための神経膠腫亜領域のレーザーキャプチャマイクロダイセクション。J. Vis. Exp.(2020年)

このビデオでは、凍結マウス脳腫瘍組織をクライオスタットを使用して切片化する様子を実演しています。このようにして得られた凍結脳組織切片は、さらなる分析まで低温で保存される。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 凍結脳腫瘍組織の切片化

1. 2 μm ポリエチレンナフタレート (PEN) スライドにサンプル情報を記載したラベルを付けます。組織切片は、切片化後、これらのスライド上に直接配置されます。
2. クライオスタットチャンバーの温度を-20〜-24°Cに設定します。切片を作る前に、サンプルブロックをクライオスタットチャンバーに置き、チャンバー内の温度まで30〜60分間平衡化します。
3. クライオスタットチャンバーとナイフホルダーを100%エタノールで洗浄し、使用するブラシにRNase洗浄液をスプレーします。クライオスタットチャンバー内で作業し、型を取り外し、脳を含むOCTブロックをOCTでクライオスタット試料ディスクに取り付けます。
4. 使い捨てブレードをセクショニングホルダーに取り付けます。
5. 脳を10μmの厚さで切片にします。ティッシュに縞や引っかき傷の線がないことを確認してください。絵筆を使用して、ティッシュを慎重に平らにし、切断面に巻き戻します。
6. 脳切片を含む組織をRNaseフリーのPENスライドガラスに慎重にマウントします。正に帯電したスライドガラスを指で組織の方向に反転させ、スライドガラスを組織部分に向かってスムーズに押し下げます。
   手記： 手の温度は、ティッシュがガラスに付着するのを助けます。
7. 脳切片をスライドに取り付けた後、スライドをクライオスタットチャンバー内の箱に保管し、-80°Cで保管します。スライドを室温で保管しないでください.
   手記：ティッシュの折り畳みや裂け目は一般的です。正確な事後解析を行うには、これらのアーチファクトを最小限に抑えることが重要です。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
PENメンブレンスライドガラス(2μm)	リエカ	1150518
研究用クライオスタット	ライカ	CM3050の
RNaseZap RNase除染ソリューション	フィッシャーサイエンティフィック	AM9780
使い捨て埋め込み型を剥がす	電子顕微鏡科学	70182
Pinpointソリューション	ザイモリサーチ	D3001-1
ティッシュプラスOCTコンパウンド	フィッシャーサイエンティフィック	23-730-571

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