CreER-LoxPシステムに基づく標的遺伝子の不活性化:マウスモデルにおける標的遺伝子ノックアウトのためのタモキシフェン誘導性Creリコンビナーゼシステム

要約

出典:Hubner, E. K., et al. 流体力学尾静脈注射を用いたマウス肝細胞の遺伝的In vivo改変のための構成的および誘導可能なシステム。J. Vis. Exp. (2018年)

このビデオでは、タモキシフェン誘導性Creリコンビナーゼシステムを使用して、マウスモデルにタモキシフェンを腹腔内注射した後の標的遺伝子ノックアウトの手順を説明しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. タモキシフェンによるトランスフェクトCreERの誘導

>注意:タモキシフェンは有害であり、癌性であるか、または生殖能力を損なう可能性があります。安全データシートを参照してください。

1. 腹腔内タモキシフェン注射を3日間連続して計画します。.
2. 1日目に、10 mgのタモキシフェンを40 μLのエタノールに溶解します。55°Cで10分間インキュベートします。タモキシフェンが溶解するまで数回渦
巻きます。
3. 960μLのコーン油を加えます。55°Cで5分間インキュベートし、数回ボルテックスして透明な溶液を得ます。
4. 27Gの針が付いた1mLのインスリン注射器で溶液を調製します。
5. 親指と2本目の指でマウスの首を慎重につかみ、手の付け根と4本目と5本目の指の間に尻尾を固定して、マウスを首筋にします。
6. 溶液0.1 mL(= 1 mgのタモキシフェン)を腹部の左下象限に腹腔内に注入します。.
7. 2日目と3日目に注射を繰り返します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
インジェクトシリンジF 1 ml	ブラウン	9166017V	腹腔内注射用
タモキシフェン	シグマ・アルドリッチ	T5648-1G	CreERアクティベーションの場合
コーン油	シグマ・アルドリッチ	C8267-500ミリリットル	タモキシフェン注射用キャリア