インビボでの誘導性Tet-On調節可能なシステムベースの遺伝子発現:マウスモデルにおける標的遺伝子転写活性化のためのテトラサイクリン誘導遺伝子発現システム

要約

出典:Hubner, E. K. et al.Constitutive and Inducible Systems for Genetic In vivo modification of mouse hepatocytes using hydrodynamic tail vein injection. J. Vis. Exp. (2018)

このビデオは、マウスモデルにおけるテトラサイクリン、またはTet-On遺伝子発現システムを示しています。テトラサイクリン誘導体であるドキシサイクリンの存在下では、逆テトラサイクリン制御トランスアクチベータータンパク質からなるTet-Onシステムが活性化され、目的の遺伝子を発現します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. テトラサイクリン依存性遺伝子またはshRNA発現の誘導

>注意:ドキシサイクリンは有害である可能性があります。安全データシートを参照してください。

>注:実験の種類と期間に応じて、ドキシサイクリンを飲料水に供給することができます。

1. 短期間の実験(<10日間)の場合は、次のプロトコルを使用して飲料水を介してドキシサイクリンを投与します。.
   1. スクロース5gを水道水100mLに溶かします。オートクレーブ。
   2. 100 mgのドキシサイクリンヒクレートを5 mLのショ糖溶液(ステップ1.1.1)に15 mLの円錐管で溶解します。.
   3. 10 mLシリンジを使用して、0.2 μmフィルターで溶液を滅菌ろ過します。ステップ1.1.1で調製したスクロース溶液に加えます。
   4. ドキシサイクリン-スクロース溶液を飲料水としてマウスに供給します。.毎日チェックし、溶液が濁り、細菌の異常増殖を示している場合は交換してください(遅くとも3日後に透明な溶液を交換してください)。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
D(+)-サッカロース	カール・ロス	4621.1	ドキシシリン溶液の甘味料
ドキシサイクリンヒクレート	アプリケム	A2951,0025	テトラサイクリン依存性発現の活性化
Injekt 10 ml シリンジ	ブラウン	4606108V
フィルトロプールS 0.2	ザルシュテット	831.826.001	ドキシサイクリンのろ過用