方法論記事

Planar Supported Lipid Bilayer Assay:生体膜模倣体上のセプチンアセンブリを調査するための顕微鏡ベースのIn Vitro技術

2025年7月8日

この記事について

要約

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出典:Curtis, B. N. et al.生物物理学的特性と機能を研究するための膜でのセプチンアセンブリの再構成。J. Vis. Exp.(2022年度)

このビデオでは、全反射蛍光顕微鏡を使用して、in vitroでガラス支持脂質二重膜上のセプチン組織を調査する手順を示します。

プロトコル

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1. 平面脂質二重膜

  1. スライドのプラズマクリーニング<br /> 手記：プラズマ洗浄は、有機汚染物質を除去し、ガラスの親水性を高め、効率的な脂質吸着を保証します。次の手順は、使用するプラズマクリーナーとガラスカバースリップに応じて変更または最適化が必要になる場合があります。
    1. プラズマクリーナーを酸素で5分間パージして、ラインとチャンバーから空気を取り除きます。これは、プラズマクリーナーを運転するときに、ラインとチャンバーに主に酸素が存在することを確認し、より一貫した二重層調製を提供するためです。
    2. パージ中に、N2やArなどの不活性ガスをマイクロカバースライドに流して、ほこりや微粒子を取り除きます
      随意：カバーガラススライドは、片面に100%イソプロパノールをスプレーし、続いて水を噴霧することで洗浄できます。イソプロパノール - 水洗を3回繰り返し、次にN2ストリームで乾燥させます。
    3. ドライカバーのスライドガラスをセラミックのクレードルに配置します。カバーガラスがチャンバーの長辺と平行になるように、プラズマチャンバーの背面にクレードルを配置します(これにより、プラズマクリーニング中にカバーガラスが所定の位置に保持されます)。プラズマクリーナーを最大出力で酸素状態で15分間運転します....

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結果

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図1:反応チャンバーのセットアップの概略図。カスタムチャンバーを調製するには、0.2 mL PCR チューブを、チューブが漸減し始める場所とキャップ (赤い破線) で切断します。次に、カットされたチューブの未カットの縁をUV活性化接着剤(青)の薄層でコーティングし、カバースリップに接着剤を塗ります。

....

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開示事項

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利益相反は宣言されていません。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
0.2 mL PCRチューブ、フラットキャップ付き、ナチュラルワトソン137-211C(特)
ヘープスシグマ・アルドリッチH3375-1KGさん
塩化マグネシウムVWRの7791*18*6
メチルセルロース4000cpシグマ・アルドリッチM052-100G
平面二重膜用のマイクロガラスカバースリップ松波中止22×22
光学接着剤ノーランド・ソーラブNOAの68ガラスまたはプラスチック用の柔軟な接着剤
プラズマクリーナープラズマエッチングPE-25電圧:120V、60Hz、電流:15アンペア
塩化カリウムVWRの0395-1キロ
UVランプスペクトロラインENF-260Cの115 ボルト、60 Hz、0.20 アンペア
ウシ血清アルブミン(BSA)シグマ・アルドリッチA4612-25Gの
ベータメルカプトエタノール(BME)シグマ・アルドリッチM6250-100ミリリットル
DOPCのAvanti Polar Lipids(アバンティポーラーリピッド)850375
エッグリスローダミンPEAvanti Polar Lipids(アバンティポーラーリピッド)810146
ス

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タグ

UV

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