リガンドと分析物間の相互作用を検出するためのバイオレイヤー干渉法技術

Abstract

出典:Desai, M., et al.転写におけるタンパク質間相互作用を研究するための生体層干渉法(BLI)の応用。J. Vis. Exp.(2019年)

このビデオでは、リガンドと標的分析物との間の分子間相互作用をリアルタイムで検出するバイオレイヤー干渉法(BLI)技術を実演します。BLIは、バイオセンサー表面の固定化されたリガンドの層から反射された白色光が溶液中の分析対象物と相互作用する際の干渉パターンの変化を測定します。

Protocol

1. バイオセンサーの水分補給とアッセイのセットアップ

1. BLItzマシンの電源を入れます。
2. マシンがマシンの背面にあるUSBデータ出力ポートを介してコンピューターに接続されていることを確認します。
3. コンピュータで、関連するソフトウェア(BLItz Proなど)を開き、画面の左側にあるAdvanced Kineticsをクリックします。
4. ソフトウェアで、実験に関するすべての適切な情報(実験名、説明、サンプルID、タンパク質濃度など)をそれぞれの見出しの下に入力します。
5. [Biosensor Type] をクリックし、ドロップダウン メニューから [Ni-NTA] を選択します。
   1. [Run Settings] 見出しの下で、[Shaker] が [Enable] に設定されていることを確認します。
   2. 「ステップ タイプ リスト」(Step Type List) の見出しの下に、「初期ベースライン」(Initial Baseline)、「荷重」(Loading)、「ベースライン」(Baseline)、「関連付け」(Association)、および「Dissociation」(解離) の 5 ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
BLItzマシン	フォルテバイオ	45〜5000	デバイス
Ni-NTAバイオセンサートレイのディップ&リード	フォルテバイオ	〒18-5101	poly-Hisタグ付きタンパク質用のすぐに使用できるNi-NTAバイオセンサー
ドロップホルダー	フォルテバイオ	〒45-5004	デバイス
PCRチューブ(0.2 mL)	トーマス・サイエンティフィック	CLS6571	プラスチック製品
微量遠心チューブ(黒)	サーモフィッシャーサイエンティフィック	03-391-166	プラスチック製品
キムワイプ	サーモフィッシャーサイエンティフィック	06-666A	プラスチック製品
DTTの	サーモフィッシャーサイエンティフィック	R0861	ケミカル
EDTAの	ミリポアシグマ	E6758	ケミカル
MgCl2	ミリポアシグマ	M8266	ケミカル
NaCl	ミリポアシグマ	S9888	ケミカル
トリス-HCl	ゴールドバイオ	T095100	バッファ