生体分子相互作用検出技術

このビデオでは、タンパク質間相互作用を検出および定量化するための電界効果バイオセンシング(FEB)技術について説明します。グラフェンバイオセンサーに固定化された標的タンパク質は、溶液中の分析種タンパク質と相互作用し、FEBシステムに電流変化をもたらします。この電気的応答の変化は、タンパク質間の結合親和性を示しています。...

このビデオでは、質量測光を使用してフローチャンバー内の抗原-抗体相互作用を研究する方法を示します。集束された光は、分子の質量に基づいて異なる方法で散乱します。検出器は散乱光を収集し、分子量と相関するさまざまな強度のスポットとして干渉パターンを生成します。...

このビデオでは、蛍光タンパク質、ドナーeGFP、およびアクセプターmCherryで標識された細胞質タンパク質を発現する生きた細菌のタンパク質間相互作用を決定するためのFLIM-FRETイメージング技術について説明しています。また、この組み合わせ技術により、相互作用するタンパク質の定量も可能になります。...

このビデオでは、HEK細胞凝集アッセイを通じてシナプス細胞接着分子間の細胞間相互作用を測定する技術を実演します。このアッセイでは、所望のシナプス前細胞接着分子と蛍光タンパク質を発現する同数のHEK細胞を、シナプス後細胞接着分子と別の蛍光タンパク質を発現するHEK細胞と混合します。細胞接着分子間の相互作用により、細胞は凝集し、これは蛍光顕微鏡で測定できます。...

このビデオでは、線虫細胞におけるin...

このビデオでは、タンパク質間相互作用解析のためのPVDF膜上の共免疫沈降タンパク質複合体のデモを行っています。複合体から還元されたタンパク質をトリプシンで処理して、小さなペプチドで個々のタンパク質を切断し、残りのペプチドをPVDF膜から抽出しました。次に、複合体中の両方のタンパク質に由来するプルペプチドを乾燥させ、さらなる分析のために低濃度のギ酸に再懸濁しました。...

このビデオでは、リガンドと標的分析物との間の分子間相互作用をリアルタイムで検出するバイオレイヤー干渉法(BLI)技術を実演します。BLIは、バイオセンサー表面の固定化されたリガンドの層から反射された白色光が溶液中の分析対象物と相互作用する際の干渉パターンの変化を測定します。...

このビデオでは、蛍光揺らぎ分光法を使用して、細胞間接触における細胞表面タンパク質間の相互作用を検出する方法を示します。蛍光タンパク質で標識された目的の膜貫通接着受容体を発現し、スペクトル的に分離された2つの蛍光標識を持つ2つの異なる細胞集団を混合することにより、異なる色の蛍光を持つ2つの隣接する細胞の受容体間の相互作用が、蛍光強度の変動の相互相関を介して評価されます。...

このビデオでは、抗GFP抗体でコーティングされたビーズを使用して、GFPタグ付き野生型および変異PD-1タンパク質の共免疫沈降を行う技術を示します。ビーズ結合したPD-1-GFPタンパク質は、PD-1と相互作用するSHP2タンパク質とインキュベートされ、SHP2の相互作用に重要な役割を果たすPD-1の特定の構造モチーフを同定することができます。...

このビデオでは、固定化された最初のタンパク質への2番目のタンパク質の結合を測定することにより、2つのタンパク質間のタンパク質間相互作用を検出するELISAベースの技術について説明しています。結合した第2のタンパク質は、西洋ワサビペルオキシダーゼなどの酵素で標識された特異的抗体を使用して検出されます。...

このビデオでは、トランスデューサーチップに固定化された標的抗原と抗体との相互作用を研究するための導電率測定バイオセンサーアッセイを実演しています。バイオセンサーは、二官能性キメラタンパク質(機能的な触媒部位を持つβ-ラクタマーゼ酵素で、固定化された標的抗原に結合するためのナノボディに融合するように設計されています。結合すると、β-ラクタマーゼ酵素による抗生物質基質の触媒加水分解により電気信号が生成され、抗原と抗体の相互作用が確認されます。...

このビデオでは、ビオチン化細胞透過性ペプチドを使用して細胞内のタンパク質間相互作用を検出する技術を示しています。細胞透過性ペプチドは、結合ペプチドが細胞内に侵入し、その相互作用タンパク質に特異的に結合するのを促進します。ビオチンは、アビジンに結合した後、細胞溶解物から相互作用するタンパク質の複合体を精製することができます。...

このビデオでは、特定のタンパク質の自己相互作用を検出するための酵母2ハイブリッドアッセイを実演しています。このアッセイでは、目的のタンパク質は、β-ガラクトシダーゼ酵素をコードする転写因子の2つのドメインにタグ付けされます。2つのタンパク質が相互作用すると、転写と翻訳が酵素を形成し、生化学的アッセイを使用して検出されます。...

このビデオは、タンデムアフィニティー精製 -...

このビデオでは、センサーチップを使用して2つの分子間の相互作用を研究するための表面プラズモン共鳴(SPR)技術について説明しています。共鳴角の変化と反射光の強度は、2つの分子の会合と解離の関数として検出され、これにより2つの分子間の相互作用に関する情報が得られます。...

このビデオでは、15のN標識野生型および変異型エンボプラキンタンパク質と非標識ビメンチンタンパク質との間のタンパク質間相互作用を研究するための核磁気共鳴分光法の技術について説明しています。野生型エンボプラキンとビメンチンとの相互作用が成功すると、NMRスペクトルでは広範な線幅が広がり、ピークが消失しますが、変異したエンボプラキンとビメンチンとの間に相互作用がないと、NMRスペクトルではピークが十分に分解されます。...

このビデオでは、標的タンパク質に対して高い親和性でタンパク質を発現する遺伝子組み換え済みファージを単離するファージディスプレイ技術を実演します。...

このビデオでは、タンパク質のホモオリゴマー化を研究するための蛍光揺らぎ分光法(FFS)の手法を実演しています。サンプル中の蛍光標識タンパク質は、FFSを用いたタンパク質オリゴマー化を研究する際に、薬剤を用いて二量体化されます。共焦点顕微鏡を用いて、タンパク質が小さな観察領域に出入りする際に、蛍光分子の明るさの変動を解析し、タンパク質のオリゴマー状態を決定します。...

このビデオでは、タンパク質間相互作用を評価するためのBiFC-PALM(光活性化局在顕微鏡と二分子蛍光相補の組み合わせ)について説明しています。BiFCは、2つの蛍光タンパク質フラグメントと2つの相互作用する目的のタンパク質との融合を伴います。2つのタンパク質が相互作用すると、フラグメントが近接し、2つの部分が一緒になって機能的な蛍光タンパク質を再構成できます。単一の蛍光色素の蛍光は、PALMによって細胞内の単一分子レベルで局在します。...

このビデオでは、蛍光異方性法を使用して、蛍光標識付きShwachman-diamond症候群(SBDS)タンパク質と伸び因子様1...

このビデオでは、非標識過剰発現タンパク質と低分子との間のタンパク質-リガンド相互作用を研究するための細胞内核磁気共鳴分光法を実演します。リガンド-タンパク質相互作用の成功は、目的のスペクトル領域に追加のピークセットが出現し、元のピークが徐々に置き換えられることによって視覚的に確認されます。...

このビデオでは、T7ファージディスプレイペプチドライブラリーのQCMバイオセンサーベースのバイオパニングを使用して、タンパク質と薬物の相互作用を研究する方法を示しています。QCMバイオセンサー上に特定のペプチドを示すファージのバイオパニングにより、高親和性ペプチドの特異的な単離が可能になり、その後のアミノ酸シーケンシングにより、標的タンパク質上の特異的な相互作用部位の同定に役立ちます。...

このビデオでは、サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)とマルチアングル光散乱(MALS)の能力を活用するSEC-MALSについて説明しています。SEC-MALSでは、SECはタンパク質またはタンパク質複合体をそのサイズに基づいて分離し、MALS検出器は分子によってさまざまな角度で散乱された光の強度を測定することにより、平均分子量を決定します。...

この動画では、コンフォメーション特異的なシングルドメイン抗体を用いて特異的なタンパク質二量体を検出・単離するためのBiCAPという二分子相補型アフィニティー精製のデモを行っています。...

このビデオでは、CXCR4を標的とする低分子の存在下で、CXC Chemokine Receptor 4 (CXCR4) とその蛍光標識天然リガンドCXC Chemokine Ligand 12 (CXCL12)...

このビデオは、レポーターアッセイに基づく受容体-リガンド相互作用の検出を示しています。受容体-リガンド相互作用が成功すると、下流のシグナル伝達経路が活性化され、溶液中の分泌レポーター分子としてサイトカインが生成され、放出されることがELISAで確認されています。...

このビデオでは、生体膜力プローブ(BFP)を使用して、受容体とリガンド間の力を測定しています。この手法では、プローブビーズ上に結合したpMHCと標的細胞上のTCRとの間の結合を切断するために必要な圧力をモニタリングすることにより、相互作用を検出することができます。...

このビデオでは、GTPase結合タンパク質パートナーを研究するための競合アッセイを実演しています。磁気ビーズに固定化されたヌクレオチド結合GTPaseタンパク質を利用すると、GTPase上の同じ結合部位に対する2つの相互作用タンパク質パートナー間の競合的結合を研究し、タンパク質パートナーの結合親和性を評価することができます。...

このビデオでは、インフルエンザウイルス株の抗原性サブタイプが印刷されたマイクロアレイスライドを使用して、複数のヒト血清サンプル中の抗体アイソタイプを検出するプロセスを実演します。...

このビデオでは、赤外線蛍光標識DNAプローブを使用してタンパク質-DNA相互作用を検出する電気泳動移動度シフトアッセイを実演します。タンパク質がDNAプローブに結合すると、大きな複合体が形成され、ゆっくりと移動し、ゲル上にシフトしたバンドとして現れます。...

このビデオでは、タンパク質結合クロマチンフラグメントの選択的免疫沈降を介して、オリゴデンドロサイト前駆細胞のゲノムDNAの特定の領域上のタンパク質結合部位を特定するクロマチン免疫沈降技術を示しています。この方法は、遺伝子調節に関与する転写因子を含む、いくつかの調節タンパク質の相互作用を研究するのに役立ちます。...

このビデオでは、転写因子とDNAの相互作用を監視するのに役立つ高性能蛍光異方性について説明しています。このアッセイは、蛍光色素で標識されたDNAの分子回転または異方性による分極の程度を測定することにより、蛍光色素で標識されたDNA分子とその特異的転写因子との相互作用をモニターします。...

このビデオでは、RNA結合タンパク質(RBP)とRNAの相互作用を研究するための細菌のin...

このビデオでは、標的DNAと相互作用する複数のタンパク質を検出する改変酵母ワンハイブリッドアッセイを実演します。形質転換酵母細胞は、レポーター遺伝子の上流に標的DNA配列を含んでいます。さらに、転写因子タンパク質を発現します。タンパク質が複合体を形成し、標的DNAに結合すると、レポーター遺伝子が発現し、酵素的に検出することができます。...

このビデオでは、ビオチン標識されたdsRNA基質を巻き戻すための標的タンパク質のヘリカーゼ活性を決定する手順を実演します。この酵素の活性は、電気泳動移動度シフトを解析し、続いて化学発光酵素結合ストレプトアビジンを用いた化学発光アッセイを行うことで同定しました。...

この動画では、照射した細胞核の二本鎖DNA切断部位におけるDNA修復タンパク質γH2AXと53BP1の局在を可視化する免疫蛍光法について解説します。...

このビデオでは、mRNAのアデニル酸ウリジル酸リッチエレメント(ARE)配列と相互作用するRNA結合タンパク質(RBP)を同定するためのin vitro...

このビデオでは、目的の標的タンパク質の特定のRNA結合配列を特定するための指数関数的濃縮(SELEX)法によるリガンドの系統的な進化について説明します。タンパク質は、ランダム化されたRNA配列の大規模なプールとインキュベートされ、タンパク質結合RNA配列は単離され、PCR増幅され、それらのタンパク質結合部位を同定するために配列決定されます。...

この動画では、特定の遺伝子座におけるDNA分子上の融合タンパク質凝縮物の集合を、1分子イメージングを用いて可視化する方法を説明しています。これらの凝縮物は、LCD-LCDおよびLCD-DBDの相互作用によって形成され、RNAポリメラーゼIIの動員と遺伝子転写の促進を可能にします。...

このビデオでは、生体分子とリガンドの相互作用を研究する手法である示差走査熱量測定を実演しています。DNAアプタマーと熱不安定性リガンドの結合は、サンプルに加熱と冷却のサイクルを繰り返し適用し、熱力学分析のためのスキャンを取得することによって研究されます。...

このビデオは、タンパク質-脂質相互作用を研究するためのマイクロスケールの熱泳動を示しています。このアッセイは、温度勾配に応答した蛍光標識タンパク質の熱泳動運動を定量化することにより、分子間の相互作用を検出します。蛍光分子は、異なる濃度の非蛍光脂質分子と混合され、溶液中の分子の混合物は毛細血管にロードされます。キャピラリー内のサンプルに温度勾配を適用し、温度勾配内の蛍光分子の動きを検出して記録します。...

このビデオでは、定量的フローサイトメトリーを使用して、タンパク質と人工リン脂質小胞との相互作用を示しています。蛍光標識タンパク質が蛍光標識リン脂質小胞に結合すると、平均蛍光強度が増加し、この増加はフローサイトメーターによって検出されます。...

このビデオは、タンパク質の脂質二重層への結合を調査するための散逸性微重量測定技術を示しています。マイクロバランスのクォーツセンサーの表面をコーティングするために、小さな単層小胞が追加されます。標的リン脂質結合タンパク質のカルシウムイオン依存性結合を利用して、センサーの発振周波数の変化と発振の散逸を監視し、タンパク質-脂質二重層結合の性質を決定します。...

このビデオでは、マイクロ流体プラットフォームと呼ばれる担持脂質二重膜のホスファチジルエタノールアミン脂質にタグ付けされたpH感受性蛍光色素を使用して、pH調節アッセイを使用して、マイクロ流体パターンでのタンパク質-ホスホイノシチド相互作用を示しています。タンパク質がリン脂質に結合した後のpHの調節は、蛍光消光を引き起こします。...