浮力活性化細胞ソーティングを用いた浮選ベースのT細胞単離

Abstract

出典: Snow, T., et al. マイクロバブルを使用したヒト末梢血単核細胞サンプルからの浮遊選鉱ベースのT細胞の単離、活性化、および増殖 。(2022年度)

このビデオは、官能基浮力活性化セルソーティング(BACS)技術を使用して、末梢血単核細胞(PBMC)からのT細胞の単離を示しています。単離技術では、ビオチン化抗CD3抗体で細胞を標識し、ストレプトアビジン結合マイクロバブルを用いて抗体結合細胞を分離することにより、CD3+ T細胞を正選択します。

Protocol

1. ポジティブセレクションを用いたマイクロバブルによるT細胞の単離

>注:このプロトコルは、SAMBを使用した小規模なCD3⁺ポジティブセレクションアプローチを詳述しています。

1. 市販のPBMC 3 x 10⁸ を 2.5 mL の分離バッファーに 2.5 mL で、ビオチン化抗 CD3 (OKT3) 抗体と入れて、100 万細胞あたり 25 ng の抗体濃度 (25 ng/M) でインキュベートします。ピペッティングで上下させて穏やかに混合し、室温で10分間インキュベートします。
2. ストレプトアビジンマイクロバブル(SAMB)を、メーカーが報告したSAMB濃度に応じて、0.5(SAMB量):1(細胞量)の比率で添加します。.
3. 市販のエンドオーバーエンド(EOE)ローテーターを使用して、室温で20rpmで10〜15分間混合します。室温で400 x gで5分間遠心分離します。
4. 遠心分離後、陽性で選択された細胞は、SAMBと共に懸濁液の一番上にあります。残りの選択されていない細胞は、チューブの底にある細胞ペレットにあります。9インチのガラスピペットを使用して、気泡細胞層の下の先端をチューブの底に挿入し、電子ピペットで細胞ペレットと下清を吸引し、新しいチューブに移します。

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
ビオチン抗ヒトCD3 (OKT3) 抗体	バイオレジェンド	317320
ロイコパック	バイオIVT	HUMANLMX100-0001129
正常なヒトPBMC	バイオIVT	ヒューマンHLPB-0002562
ストレプトアビジンマイクロバブルキット(Akadeumの分離バッファーを含む)	アカデミック	11110-000